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黑果枸杞子对过度训练大鼠骨骼肌MAPK信号通道蛋白表达及抗氧化应激损伤能力的影响
目的:研究黑果枸杞子对过度训练大鼠骨骼肌MAPK信号通道蛋白表达及抗氧化应激损伤能力的影响.方法:以等量负荷有氧运动训练和大强度耐力训练大鼠为模型,50只SPF级Wistar 49 d龄雄性大鼠为对象,随机分为4组,分别为正常组、有氧训练组、过度训练组、过度训练+黑果枸杞子组,每组12只(剔除不符合实验要求的大鼠).每天灌胃(ig)给药1次,黑果枸杞子干预组剂量为4.48 mg· kg-1,ig体积为5 mL·kg-1,其他组ig等体积生理盐水.42 d负荷游泳训练后,测试各组大鼠骨骼肌丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号系统蛋白表达及氧化应激损伤相关指标,分光光度法检测骨骼肌超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量;蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测MAPK信号通道蛋白表达;酶联免疫吸附测试法(ELISA)检测3-硝基酪氨酸(3-NT),8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)含量;乙酰半胱氨酸法检测血清肌酸激酶(CK)活性;苯肼显色法检测乳酸脱氢酶(LDH)活性.结果:力竭游泳时间,有氧训练组较正常组有所延长,黑果枸杞子干预组较过度训练组显著增加(P＜0.01).骨骼肌SOD活性,有氧训练组略高于正常组;过度训练组较正常组和有氧训练组明显下降(P＜0.05),黑果枸杞子干预组较过度训练组明显升高(P＜0.05).骨骼肌MDA含量,有氧训练组略低于正常组;过度训练组较正常组和有氧训练组显著升高(P＜0.01),黑果枸杞子干预组较过度训练组显著降低(P＜0.01).骨骼肌3-NT,8-OHdG,有氧训练组略高于正常组;过度训练组较正常组和有氧训练组显著升高(P＜0.01);黑果枸杞子干预组较过度训练组明显降低(P＜0.05).血清LDH活性,有氧训练组略高于正常组;过度训练组较正常组和有氧训练组均显著升高(P＜0.01);黑果枸杞子干预组较过度训练组明显升高(P＜0.05).血清CK活性,有氧训练组略高于正常组;过度训练组较正常组和有氧训练组显著升高(P＜0.01);黑果枸杞子干预组较过度训练组显著降低(P＜0.01).p38 MAPK,细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)信号通路蛋白表达,有氧训练组高于正常组(P＜0.05),低于过度训练组(P＜0.05);过度训练组高于安静组(P＜0.01);黑果枸杞子干预组高于正常组(P＜0.05),低于过度训练组(P＜0.05).结论:补充黑果枸杞子可以有效缓解过度训练导致的机体内环境失衡,抑制MAPK信号通路蛋白的过度表达,激活过度训练大鼠骨骼肌MAPK信号转导系统诱导抗氧化酶基因表达,提高机体尤其是骨骼肌的氧自由基清除能力,调节机体的抗氧化应激损伤能力,预防和延缓氧化应激损伤及运动疲劳的发生与发展.
关键词： 黑果枸杞子 过度训练 丝裂素活化蛋白激酶信号通路 蛋白表达 抗氧化应激损伤 -
Hippo信号通路调控间充质干细胞抗氧化应激损伤能力的实验研究
目的 探讨Hippo信号通路对小鼠骨髓来源间充质干细胞(mMSCs)抗氧化应激损伤的调控作用.方法 直接贴壁法分离C57BL/6小鼠原代mMSCs,通过流式细胞仪检测和诱导其成骨、成软骨、成脂分化并进行鉴定.通过2-脱氧-D-葡萄糖(2-DG)或Hippo信号通路高效特异选择性抑制剂XMU-MP-1调节Hippo信号通路.通过不同浓度双氧水(H2O2)共培养来模拟氧化应激损伤,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法评估mMSCs存活情况;蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测mMSCs中Hippo信号通路关键组分表达;Western Blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax的表达.结果 2-DG呈浓度依赖性地激活Hippo信号通路,其浓度为5 mmol/L时效应明显〔与空白对照组比较,大肿瘤抑制基因1(LATS1)蛋白(灰度值):2.33±0.25比0.98±0.03,磷酸化Yes相关蛋白(p-YAP)/YAP蛋白比值(灰度值):2.30±0.35比1.01±0.05,14-3-3蛋白(灰度值):2.19±0.40比0.99±0.04,均P<0.05〕;100 nmol/L的XMU-MP-1可抑制Hippo信号通路活化〔与空白对照组比较,LATS1蛋白(灰度值):0.69±0.10比0.98±0.03,p-YAP/YAP蛋白比值(灰度值):0.65±0.06比1.01±0.05,14-3-3蛋白(灰度值):0.75±0.11比0.99±0.04,均P<0.05〕.H2O2呈浓度依赖性抑制mMSCs存活,0.1 mmol/L是其抑制mMSCs存活的低浓度〔与空白对照组比较,mMSCs存活率:(81.25±11.85)%比(100.44±12.39)%,P<0.05〕.H2O2呈浓度依赖性抑制Hippo信号通路,0.1 mmol/L是其抑制Hippo信号通路的低浓度〔与空白对照组比较,LATS1蛋白(灰度值):0.75±0.06比1.01±0.09,p-YAP/YAP蛋白比值(灰度值):0.69±0.05比0.98±0.05,均P<0.05〕,并可导致Bcl-2/Bax比值下降(灰度值:0.48±0.18比1.06±0.09, P<0.05).与0.1 mmol/L H2O2组比较,5 mmol/L的2-DG预处理可以通过活化Hippo信号通路〔LATS1蛋白(灰度值):0.95±0.05比0.64±0.06,p-YAP/YAP蛋白比值(灰度值):0.87±0.03比0.45±0.16,均P<0.05〕进而提高Bcl-2/Bax比值(灰度值:1.14±0.16比0.77±0.12,P<0.05),改善mMSCs存活〔(92.80±9.43)%比(75.47±9.43)%,P<0.05〕;反之,100 nmol/L的XMU-MP-1预处理可通过抑制Hippo信号通路〔LATS1蛋白(灰度值):0.39±0.03比0.64±0.06,p-YAP/YAP蛋白比值(灰度值):0.28±0.04比0.45±0.16,均P<0.05〕进而降低Bcl-2/Bax比值(灰度值:0.63±0.20比0.77±0.12,P<0.05),进一步抑制mMSCs存活〔(57.54±4.59)%比(75.47±9.43)%,P<0.05〕.此外,急性呼吸窘迫综合征(ARDS)小鼠肺组织较正常肺组织能明显促进mMSCs中Hippo信号通路活化〔LATS1蛋白(灰度值):1.71±0.08比1.00±0.10,p-YAP/YAP蛋白比值(灰度值):2.46±0.39比1.01±0.04,14-3-3蛋白(灰度值):2.27±0.52比1.01±0.08,均P<0.05〕.结论 Hippo信号通路可通过调控凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax的平衡,进而影响mMSCs的存活和抗氧化应激损伤的能力.
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海风藤总黄酮抗氧化应激损伤作用研究
目的:观察海风藤总黄酮对过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)氧化应激损伤的影响.方法:采用MTT法检测海风藤总黄酮对HUVECs的保护作用,采用分光光度法测定细胞培养上清液中细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase SOD),丙二醛(malondialdehyde MDA)及一氧化氮(nitric oxide,NO)含量;酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中内皮素1(Endothelin 1,ET-1)白细胞介素6(Interleukin6,IL6)、白细胞介素8(Interleukin8,IL8)的含量.结果:海风藤总黄酮可以提高氧化应激损伤的HUVECs存活率,增加SOD活性,升高NO水平,降低MDA、ET-1、IL-6、IL-8水平.结论:海风藤总黄酮对过氧化氢诱导的HUVECs氧化应激损伤有保护作用,其作用机制可能与调节SOD、MDA、ET-1、NO、IL-6、IL-8氧化应激及炎症相关因子有关.
