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不同刺激强度电针对糖尿病胃轻瘫大鼠胃肠运动功能及胃窦平滑肌Ras同源物基因组成员A/相关卷曲螺旋蛋白激酶信号表达的影响
目的:观察不同刺激量电针腧穴对糖尿病胃轻瘫(DG P)大鼠Ras同源物基因组成员A(Rho A)/Ras同源物相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)信号表达的影响,探讨刺激量是否为腧穴配伍效应的影响因素.方法:S D大鼠随机分为空白组、模型组、小刺激量组、中刺激量组、大刺激量组,每组12只.采用单次腹腔注射2％ 链脲佐菌素配合高脂高糖饮食喂养8周建立DGP大鼠模型.分别采用0.12 mA、0.24 mA、0.36 mA对小刺激量组、中刺激量组、大刺激量组电针"足三里""梁门""三阴交",每次20 min,每日1次,连续15 d.治疗后,酚红染色观察大鼠胃排空率及小肠推进率;免疫组化、Western blot法检测胃窦平滑肌组织RhoA、ROCK、肌球蛋白磷酸酶靶亚单位1(MYPT 1)、磷酸化MYPT 1(p-MYPT 1)蛋白的表达水平.结果:与空白组比较,模型组大鼠血糖明显升高(P<0.05);胃排空率、小肠推进率和胃窦平滑肌组织RhoA、ROCK、MYPT 1、p-MYPT 1蛋白表达水平明显降低(P<0.05).与模型组比较,小、中、大刺激量组的胃排空率、小肠推进率和胃窦平滑肌组织RhoA、ROCK、MYPT 1、p-MYPT 1蛋白表达水平明显升高(P<0.05).与大刺激量组比较,小刺激量组胃窦平滑肌组织RhoA、ROCK、MYPT 1、p-MYPT 1蛋白表达水平明显降低(P<0.05).结论:电针治疗能通过上调RhoA/ROCK信号的表达有效促进胃平滑肌收缩,改善糖尿病胃轻瘫的症状,且大刺激量电针上调RhoA/ROCK信号的效果优于小刺激量,因此不同的刺激量可能是影响腧穴配伍效应的因素之一.
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花生四烯酸抑制豚鼠胃窦环行肌细胞容积敏感氯电流
利用全细胞膜片钳技术,在用胶原酶急性分离的豚鼠胃窦环行肌细胞上观察了外源性花生四烯酸(arachidonic acid, AA)及其它不饱和脂肪酸对容积敏感氯电流(volume-sensitive chloride current, VSCC)的影响.细胞膜电位钳制在-60mV条件下,低渗性细胞膨胀激活VSCC.当给予按20mV间隔的去极化阶跃性方波刺激时,VSCC的电流-电压曲线具有外向性整流的特点,并表现出去极化到+40mV以上时呈现时间依赖性衰减的特点.AA呈齐量依赖性地抑制VSCC,而对VSCC的随时间衰减部分的抑制效应更明显.其它不饱和脂肪酸,如含有2个双键的亚油酸(Linoleic acid, LA)、含有1个双键的油酸(Oleic acid, OA)也抑制VSCC,抑制强度顺序为AA＞LA＞OA,但饱和脂肪酸(stearic acid, SA)对VSCC无抑制作用.提示外源性不饱和脂肪酸抑制VSCC,其抑制效应在VSCC的随时间衰减部分更明显.外源性不饱和脂肪酸对VSCC的抑制作用可能与脂肪酸链中的双键数目有关.
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Ghrelin对豚鼠胃窦平滑肌细胞钙离子浓度的影响及与NO关系研究
目的:探讨Ghrelin对豚鼠胃窦平滑肌细胞内钙离子浓度的影响及其与一氧化氮(NO)的关系.方法:采用荧光免疫组化检测胃窦平滑肌细胞ghrelin受体(GHS-R)的表达;应用钙离子(Ca2+)指示剂Fluo-3/AM作为细胞内Ca2+的荧光探针,对负载培养的平滑肌细胞应用激光共聚焦显微镜技术,检测不同浓度ghrelin对平滑肌细胞内Ca2+荧光强度(FI)的影响,以及ghrelin受体阻断剂D-Lys3-GHRP-6、NO供体硝普钠(SNP),一氧化氮舍酶(NOS)抑制剂N-硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME)对ghrelin调控Ca2+荧光强度的影响.结果:(1)豚鼠胃窦平滑肌细胞呈GHS-R免疫反应阳性表达.(2)随着ghrelin浓度升高(10-11,10-10,10-9,10-8,10-7mol/L),平滑肌细胞内Ca2+荧光强度逐渐升高,组间峰值(分别为54.7±11.5,58.1±5.7,64.8±6.6,84.9±7.1,95.7±10.5)和峰高(分别为1.8±0.3,2.1±0.8,5.3±1.3,28.9±4.2,37.6±3.7)均存在显著差异(P<0.05-0.01),即呈明显剂量依赖关系.(3)采用Glarelin受体拮抗剂D-Lys3-GHRP-6孵育后,再加入ghrelin,ghrelin可使胞内Ca2+荧光强度升高作用几乎完全被抑制(P>0.05).(4)平滑肌细胞SNP预处理后再加入ghrelin,在SNP作用下胞内Ca2+荧光强度先是明显下降(P<0.01),而后随着ghrelin的加入,Ca2+荧光强度缓慢回升,但与对照组比较仍显著降低(P<0.05).(5)L-NAME可增加细胞内Ca2+荧光强度(P<0.05),并且可显著增加ghrelin促胞内Ca2+浓度增加作用(P<0.01).结论:豚鼠胃窦平滑肌细胞有GHS-R的表达;Ghrelin通过其特异性受体可增加胃窦平滑肌细胞内Ca2+浓度,该作用可能与NO通路有关.
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蒲黄对糖尿病胃轻瘫大鼠离体胃平滑肌条的作用
糖尿病胃轻瘫(Diabetic gastroparesis DGP)是糖尿病患者常见的并发症,Kassander[1]于1958年首先提出"糖尿病胃轻瘫"的概念,其定义为:由于糖尿病并发症所致胃排空显著延长,胃内液体和固体食物猪留,因而出现一系列临床症群.蒲黄为香蒲科植物长苞香蒲(Typha angustata Bory et Chub),宽叶香蒲(T.latifolia L),水烛香蒲(T.angustifolia L.)等同属多种植物的花粉.具有活血化瘀,收敛止血的功能,中医用于现代医学研究发现其有明显的兴奋子宫,活血等作用.本实验用离体灌流方法,观察蒲黄水煎剂对DGP大鼠胃窦平滑肌条的影响并对其作用机理进行初步探讨.发现蒲黄水煎剂可增加胃窦的收缩力.为临床治疗DGP提出"糖尿病胃轻瘫"的概念,其定义为:由于糖尿病并发症所致胃排空显著延长,胃内液体和固体食物猪留,因而出现一系列临床症群.
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微丝在低渗牵张诱导毒蕈碱电流增加中的作用
在急性分离的豚鼠胃窦平滑肌细胞上, 利用膜片钳技术的传统全细胞模式记录离子电流的方法, 探讨微丝在低渗牵张诱导毒蕈碱电流增加中的作用.当豚鼠胃窦平滑肌细胞的膜电位钳制在-20 mV时, 灌流液中50 μmol/L 卡巴胆碱(carbachol, CCh)或电极内液中0.5 mmol/L GTPγS均可引导毒蕈碱电流(muscarinic current ICCh), 低渗牵张(202 mOsmol/L)分别使其增加145±27%和183±30%; 当电极内液中加入20 μmol/L的细胞松弛B (一种微丝骨架的解聚剂)时, 低渗牵张使ICCh只增加70±6%; 而电极内液中加入20 μmol/L的鬼笔环肽(一种微丝骨架的稳定剂)则使ICCh增加了545±81%.结果表明, 低渗牵张可增加由卡巴胆碱或GTPγS诱导的毒蕈碱电流, 微丝参与调节低渗牵张诱导豚鼠胃窦平滑肌细胞ICCh增加的作用.
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数字式动态滤波器对胃电信号的拾取
胃电检测仪器能无失真的记录人体胃肠体表部生物电的变化规律,是提供胃电诊断临床数据的关键,其中以3CPM频率的胃电起步电位信号的检测为重要.过去认为胃的起步电位(既慢波或第一电位)仅形成单胃电波的起步功能,但近期对胃肠道平滑肌电生理特性的研究证明:起步电位与胃窦平滑肌的低幅值收缩有相关联系,在正常情况下,胃体和胃窦是以3CPM左右的频率收缩,并远离方向扩布,在胃窦远端速度平均大于4CM/分,记录电位的形成包括二种成份:起步电位呈三相瓜,开始为正向偏移,其后为大的负向偏移,第二种成份是第二电位跟随起步电位之后的等电段,一般为类似正弦波的复合波.根据临床诊断要求,胃电曲线的记录应能正确反映信号的瞬态变化,变化趋势要清楚,无噪声信息的干扰.
