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“益肾调督”针灸法对阿尔茨海默病大鼠海马神经元线粒体动力学相关蛋白的影响
目的:观察“益肾调督”针灸法对阿尔茨海默病模型大鼠海马神经元线粒体动力学相关蛋白,即线粒体分裂蛋白1(Fis 1)和线粒体融合蛋白1(OPA 1)的影响,探讨其在保护线粒体过程中的可能有效机制.方法:将Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组和针灸治疗组,每组20只.运用海马注射Aβ1-42的方法复制模型.针灸治疗组采用针刺加灸“百会”和“肾俞”穴的方法治疗,每日1次,每次15 min,7d为1个疗程,共计2个疗程,疗程间休息1d.运用蛋白印迹技术和免疫荧光技术检测海马Fis 1和OPA 1的水平.结果:模型组海马神经元OPA 1的水平明显低于正常组和假手术组(P＜0.01),Fis 1水平明显高于正常组和假手术组(P＜0.01);而“益肾调督”针灸法能够有效上调OPA 1的水平,下调Fis 1的水平,与模型组比较差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:“益肾调督”针灸法可能通过调节线粒体分裂与融合蛋白的失衡,改善线粒体动力学异常,从而达到改善线粒体损伤,保护线粒体功能的目的.
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针刺对阿尔茨海默病模型小鼠行为学及线粒体分裂蛋白1、融合蛋白1表达和超微结构的影响
目的 观察针刺对阿尔茨海默病(AD)模型小鼠行为学,大脑海马神经元线粒体分裂蛋白1(Fis1)、线粒体融合蛋白1(OPA1)表达及线粒体超微结构的影响,探讨针刺治疗AD的作用机制.方法 40只雄性SAMP8小鼠随机分为针刺组和模型组,每组20只.另取20只同月龄雄性正常老化模型小鼠(SAMR1小鼠)作为正常组,针刺组选取"肾俞""百会""血海""膈俞"进行干预.8周后,Morris水迷宫实验检测小鼠行为学,之后提取海马组织,Western blot检测小鼠海马线粒体相关蛋白Fis1和OPA1的表达,电镜观察小鼠海马神经元线粒体超微结构.结果 与模型组比较,针刺组逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),其停留在原平台象限时间延长和穿越原平台次数明显增加(P<0.05);针刺组Fis1表达明显减弱,OPA1表达明显增强(P<0.05,P<0.01);针刺组线粒体超微结构明显改善,线粒体体密度及面密度明显增加(P<0.05).结论 针刺可能通过提高模型小鼠学习记忆能力、下调Fis1表达、上调OPA1表达和改善线粒体超微结构,达到治疗AD的作用.
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沉默线粒体分裂蛋白1基因对氟致人脑神经母细胞瘤细胞株线粒体融合蛋白和膜电位损伤的影响
目的 研究沉默线粒体分裂蛋白1 (Fis1)对人脑神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y细胞)Fis1、线粒体融合蛋白1 (Mfn1)及线粒体膜电位水平的影响,并进一步探讨线粒体融合分裂在慢性氟中毒发病机制中的作用.方法 体外培养SH-SY5Y细胞,待细胞贴壁生长进入对数增长期时进行实验,采用成组设计将细胞分为未染氟空白对照组、染氟组[2 mmol/L氟化钠(NaF)]、染氟阴性对照组[2 mmol/L NaF+非特异性小干扰RNA(siRNA)]、沉默组(2 mmol/L NaF+ siRNA-Fis1).蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中Fis1和Mfn1蛋白表达水平;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测Fis1和Mfn1 mRNA表达水平;线粒体膜电位检测试剂盒检测细胞线粒体膜电位水平.结果 与空白对照组(1.37±0.18、1.00±0.04,1.57±0.19、1.00±0.04,1.00±0.10)比较,染氟组Fis1蛋白(1.72±0.04)及mRNA表达水平(1.48±0.13)均升高,Mfn1蛋白(0.87±0.02)及mRNA表达水平(0.69±0.07)均降低,线粒体膜电位水平(0.76±0.13)降低(P均＜0.05).与空白对照组比较,沉默组Fis1蛋白(0.79±0.07)及mRNA表达水平(0.06±0.03)均降低,Mfn1蛋白(1.71±0.04)及mRNA表达水平(1.52±0.05)均升高(P均＜0.05),线粒体膜电位水平(0.94±0.01)有降低趋势.与染氟组比较,沉默组Fis1蛋白及mRNA表达水平均降低,Mfn1蛋白及mRNA表达水平均升高,线粒体膜电位水平升高(P均＜0.05).结论 人工抑制Fis1基因表达水平可降低氟致SH-SY5Y细胞的线粒体分裂和线粒体膜电位损伤.
关键词： 氟 人脑神经母细胞瘤细胞株 线粒体膜电位 线粒体融合蛋白1 线粒体分裂蛋白1 -
染氟对人脑神经母细胞瘤细胞线粒体融合蛋白1和分裂蛋白1表达与膜电位的影响
目的 评估氟对体外培养的人脑神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y细胞)线粒体膜电位和线粒体融合蛋白1(Mfn1)、分裂蛋白1(Fis1)表达的影响.方法 在SH-SY5Y细胞中加入0.0(对照)、0.4、2.0、4.0mmol/L氟化钠(NaF),培养6、12、24、48 h;利用线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1法)对SH-SY5Y细胞线粒体膜电位进行染色;使用蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测线粒体Mfn1和Fis1蛋白的表达.结果 NaF作用6、12、48 h时,与对照组(1.63±0.18、1.13±0.15、1.30±0.02)比较,2.0、4.0 mmol/L NaF处理组SH-SY5Y细胞线粒体膜电位的红绿荧光比值(1.01±0.10、0.80±0.04,0.75±0.13、0.62±0.10,0.82±0.01、0.56±0.04)明显降低(P均＜ 0.05);NaF作用6、12、48 h时,与对照组(0.93±0.03、1.05±0.07、1.17±0.04)比较,0.4、2.0、4.0mmol/L NaF处理组Mfn1蛋白的表达(0.75±0.02、0.65±0.05、0.57±0.06,0.83±0.06、0.79±0.06、0.69±0.06,0.98±0.05、0.73±0.07、0.62±0.09)明显降低(P均＜0.05);NaF作用12 h时,与对照组(0.90±0.05)比较,2.0、4.0 mmol/L NaF处理组Fis1蛋白表达(1.14±0.06,1.23±0.06)明显升高(P均＜0.05).结论 氟中毒损伤可引起神经细胞线粒体融合分裂水平改变并致线粒体膜电位下降,其改变可能与高氧化应激发病学说相关.
关键词： 氟 人脑神经母细胞瘤细胞株 线粒体膜电位 线粒体融合蛋白1 线粒体分裂蛋白1 -
MFN1在透镜诱导豚鼠近视模型视网膜上的表达及其意义
目的 建立豚鼠光学离焦近视动物模型,初步探索线粒体融合蛋白1(mitochondrial fusion protein 1,MFN1)在光学离焦豚鼠近视动物模型视网膜上的表达.方法 给15只4周龄幼年豚鼠单眼配戴-7.00 D凹透镜,制作光学离焦性豚鼠近视模型,戴透镜眼作为实验眼,另一眼为自身对照眼.戴镜前及戴镜后1周、2周、3周分别进行检影验光和眼轴长度检查,同时于各时间点分别随机处死5只豚鼠,采用免疫组织化学染色检测视网膜中MFN1的表达,双眼眼球参数检查结果比较采用t检验,对免疫组织化学检查结果做描述定性分析.结果 屈光度:豚鼠戴镜前屈光状态均为远视状态,实验眼和对照眼屈光度差异无统计学意义(P＞0.05);用-7.00 D凹透镜经1周、2周、3周光学离焦可以造成豚鼠远视屈光度数逐渐下降,戴镜后1周两组比较差异无统计学意义(p=0.380);戴镜后2周及3周实验眼与对照眼比较,差异均有统计学意义(均为P＜0.01).眼轴长度:戴镜前豚鼠双眼眼轴长度比较,差异无统计学意义(P＞0.05);戴镜后1周、2周、3周对照眼和实验眼的眼轴均较戴镜前明显延长,实验眼与对照眼的眼轴长度比较差异均有统计学意义(均为P＜0.05).免疫组织化学检测结果:双眼视网膜均可见部分视网膜神经节细胞胞浆及胞膜呈黄色或棕黄色着色,但实验眼免疫阳性细胞着色较深,阳性细胞数相对较多;早期豚鼠近视动物模型视网膜上MFN1阳性表达主要见于视网膜神经节细胞,随着透镜诱导时间的延长,MFN1在视锥视杆细胞中也出现袁达,而对照眼无此现象.结论 采用-7.00 D凹透镜能成功诱导光学离焦豚鼠近视动物模型,豚鼠视网膜上可见MFN1表达,随着透镜诱导时间的延长,表达强度和部位逐渐发生变化,提示MFN1可能在近视的发生发展过程中起着一定的作用.
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银杏内酯B诱导人结直肠癌HCT116细胞凋亡的研究
目的 探讨银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对人结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响及其可能机制.方法 通过制备HCT116裸鼠瘤模型,观察GB对肿瘤生长的影响,并通过体外培养人结直肠癌HCT116细胞,分别加入不同质量浓度GB,与其共孵育72 h,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖抑制率,Giemsa染色观察细胞形态,Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot法检测Bcl-2蛋白(B-cell leukemia/lymphoma 2,Bcl-2)、Bax蛋白(Bcl-2-associated protein x,Bax)和线粒体融合蛋白1(mitofusin 1,Mfn1)的表达.结果 GB抑制裸鼠瘤的生长(P＜0.05),并显著抑制HCT116细胞的增殖(P＜0.01),诱导HCT116细胞发生凋亡.同时,GB能够显著下调HCT116细胞Mfn1蛋白和Bcl-2蛋白的表达水平(P＜0.01),并上调Bax蛋白的表达(P＜0.05).结论 GB可能通过抑制Mfn1的表达,调节促凋亡蛋白Bax活性,降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,促进结直肠癌细胞的凋亡.
