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肠集聚性大肠埃希菌分离株脉冲场凝胶电泳分析
目的 对我国散发腹泻患者肠集聚性大肠埃希菌(EAEC)分离株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析,以了解其分子流行病学特征并初步建立我国EAEC菌株的基础数据库.方法 参照PulseNet大肠埃希菌O157∶H7的PFGE实验方法对52株EAEC分离株进行分析,并使用BioNumerics软件进行聚类.结果 在限制性内切酶Xba Ⅰ和PulseNet推荐的电泳参数下,菌株基因组酶切片段分布均匀,条带易于识别.52株EAEC分离株产生了48种PFGE带型,初步聚类为A～N 14个群,不同地区来源及不同HEp-2细胞黏附表型的菌株广泛分布在不同PFGE聚类群中.结论 我国散发腹泻患者EAEC分离株呈现高度多态性,PFGE电泳参数和限制性内切酶XbaⅠ适用于我国EAEC菌株的分析.
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急性腹泻病患者与健康体检人员肠集聚性大肠埃希菌分子特征及耐药性研究
目的 比较急性腹泻病患者与健康体检人员肠集聚性大肠埃希菌(EAEC)在携带毒力基因、耐药性及分子分型之间的差异.方法 以PCR方法检测EAEC的7种毒力基因,微量肉汤稀释法检测菌株对13种抗菌药物的耐药性,脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子分型分析.结果 来自急性腹泻病患者的分离株中,毒力基因检出率高为air,体检分离株为sat.48株EAEC对13种抗菌药物中的12种均表现出不同程度的耐药,对亚胺培南完全敏感,急性腹泻病患者分离株耐药性较体检分离株强.PFGE分型共得到43种带型,均呈现高度多态性.结论 不同来源EAEC携带的毒力基因差异不显著,PFGE带型呈高度多态性,来源于腹泻病患者的EAEC耐药性明显高于健康体检人员.
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我国EAEC分离株对HEp-2细胞的粘附特征及集聚性粘附相关基因分析
目的 了解我国EAEC分离株的HEp-2细胞粘附特征、毒力基因和集聚性粘附基因情况,探讨建立PCR检测方法的可能性. 方法 选择31株分离自腹泻患者粪便的大肠埃希菌,采用HEp 2细胞粘附试验,获得菌株的粘附表型;采用PCR方法检测毒力基因(astA、aggR、pic)及集聚性粘附相关基因(aggA、aafA、agg3A、hdaA). 结果 不同菌株在HEp-2细胞粘附试验中表现为不同的粘附表型,所含有的毒力基因及粘附相关基因不同.aggR基因阳性的13株菌中,7株表现为集聚性粘附(AA)表型,其中5株具有集聚性粘附相关基因.此外存在aggR基因阴性但对HEp-2细胞表现为集聚性粘附的非典型EAEC以及具有集聚性粘附相关基因hdaA却表现为对HEp-2细胞不粘附的菌株.结论 EAEC是一类高度异质性大肠埃希菌,HEp-2细胞粘附试验仍然是检测EAEC的“金标准”;aggR基因是一种较好的PCR诊断靶基因,在aggR基因的基础上组合其他基因,建立EAEC检测的多重PCR方法具有重要的实际意义.
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肠集聚性大肠埃希菌在健康老年人肠道中的分布及其耐药机制研究
目的 分析健康老年人肠道中肠集聚性大肠埃希菌(EAEC)的检出率,并探讨其毒力基因及超广谱β内酰胺酶(ESBL)的携带情况.方法 取健康老年人的粪便标本分别接种于血平板、SS平板、麦康凯平板进行细菌培养,用全自动微生物鉴定仪和质谱仪鉴定细菌到种;对分离的大肠埃希菌采用双纸片协同法检测其ESBL的表型,用PCR法扩增其EAEC毒力基因astA和aggR;ESBL表型阳性的EAEC菌株用PCR法检测其ESBL基因型.结果 在1 75例研究对象中,共检出160株大肠埃希菌,ESBL携带率为36.30％ (58/160);EAEC检出16株(10.o0％),其中astA阳性14株(8.75％),aggR阳性2株(1.25％);EAEC菌株的ESBL携带率为56.25％ (9/16),其基因型均为CTX-M型,其中以CTX M 14多,占66.70％ (6/9).结论 本研究获得了健康老年人肠道中EAEC的检出率及其毒力基因和ESBL的携带情况,提示我们EAEC不仅是腹泻患者的病原菌,还可以在健康老年人群中携带,且具有较高的携带率和耐药性,提醒我们加强防范.
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健康老年人肠道中肠集聚性大肠埃希菌毒力基因及超广谱β内酰胺酶的研究
目的 分析健康老年人肠道中肠集聚性大肠埃希菌(EAEC)的检出率,并探讨其毒力基因及超广谱β内酰胺酶(ESBL)的携带情况.方法 取健康老年人的粪便标本分别接种于血平板、SS平板、麦康凯平板进行细菌培养,用全自动微生物鉴定仪和质谱仪鉴定细菌到种;对分离的大肠埃希菌采用双纸片协同法检测其ESBL的表型,用PCR法扩增其EAEC毒力基因astA和aggR;ESBL表型阳性的EAEC菌株用PCR法检测其ESBL基因型.结果 175例健康体检者,共检出160株大肠埃希菌,ESBL携带率为36.25％ (58/160);EAEC检出16株(10.00％),其中astA阳性14株(8.75％),aggR阳性2株(1.25％);EAEC菌株的ESBL携带率为56.25％(9/16),其基因型均为CTX-M型,其中以CTX-M-14多,占66.67％ (6/9).结论 本研究获得了健康老年人肠道中EAEC的检出率及其毒力基因和ESBL的携带情况,提示EAEC不仅是腹泻患者的病原菌,健康老年人也可以携带,且具有较高的携带率和耐药性,提醒应加强防范.
