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外切核酸酶类文献资料
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酶切保护聚合酶链反应检测多环芳烃受体与特异性DNA的结合
目的建立一种改进的核酸外切酶保护聚合酶链反应(PCR)检测DNA-蛋白质结合物.方法将1 pmol/L至10 nmol/L(口恶)英溶液(TCDD)与100 μl含不同浓度多环芳烃受体的SD大鼠肝细胞溶质温育,再与1 fmol至100 nmol含二(口恶)英反应元件的寡核苷酸探针作用形成复合物,用核酸外切酶Ⅲ和S1核酸酶进行消化后进行PCR,通过琼脂糖电泳检测PCR产物.同时设阴性对照(二甲基甲砜,DMSO)和空白对照.结果在实验组用琼脂糖电泳可以检测到期望大小片段(285 bp)的DNA, 而对照组均为阴性.在一定范围类TCDD浓度与结合DNA之间存在剂量-效应关系.检测到的小受体量为2.5 fmol,小DNA量为2 fmol.结论核酸外切酶保护PCR无放射性污染,灵敏度和特异性高,简便易行,可作为DNA-蛋白质结合物的定性检测方法.
