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噻唑橙光化学法对红细胞中病毒及细菌灭活作用的研究
目的 探讨噻唑橙(TO)光化学法对红细胞中病毒及细菌灭活效果.方法 以伪狂犬病毒(PRV)和辛德毕斯(Sindbis)病毒为指示病毒,分别加入红细胞比积为20％的红细胞悬液中,TO孵育1h后做476 nm光照射处理；研究病毒灭活动力学特征；做TO浓度(C)、光照强度(Ⅰ)、光照时间(T)三因素三水平正交试验确定优灭活条件；优条件下检测裸照、密闭血袋中、密闭血袋充氧后的病毒灭活效果；优条件下检测血液污染常见细菌小肠结肠炎耶尔森氏菌、金黄色葡萄球菌及表皮葡萄球菌灭活效果.结果 病毒灭活动力学研究显示:在60μmol/LTO、1.06E-01 w·m-2·nm-1光强条件下,照射5 min可将大部分PRV和Sindbis病毒灭活,20 min灭活作用达峰值,分别为5.88和5.12LogTCID50；正交试验显示:裸照时PRV及Sindbis病毒灭活优条件均为I=1.33E-01 w·m-2·nm-1,T=20 main,C=80μmol/L;在此条件下,可灭活红细胞中PRV≥6.13LogTCID50(裸照,n=4)、(4.75±0.62)LogTCID50(密闭血袋,n=4)、(6.06±0.16) LogTCID50(密闭血袋充氧,n=4)；可灭活红细胞中Sindbis病毒(5.41±0.12) LogTCID50(裸照,n=4)、(3.72±0.77)LogTCID50(密闭血袋,n=4)、(5.76±0.25) LogTCID50(密闭血袋充氧,n=4).在此条件下细菌灭活效果:小肠结肠炎耶尔森氏菌(5.91±0.13)Log10、金黄色葡萄球菌＞6.8Log10、表皮葡萄球菌＞6.0 Log10.结论 TO光化学法可有效灭活红细胞中病毒,有氧情况下(裸照或充氧)病毒灭活效果好于密闭无氧.TO光化学法可有效灭活红细胞中细菌.
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亚甲蓝光化学法灭活病毒的研究--抗坏血酸对血浆凝血因子的保护作用
目的探讨抗坏血酸对亚甲蓝光化学法处理血浆时指示病毒灭活的效果,以及对部分凝血因子的保护作用.方法采用CPE法评价病毒的灭活效果,用Clauss法测定纤维蛋白原的含量和一期法判定FⅧ:C的凝血活性.结果在单采人血浆中加入1 μmol·L-1亚甲蓝和240 μmol·L-1抗坏血酸,再给以40000 lx荧光强度照射60 min,VSV滴度下降＞8lgTCID50·ml-1,并且纤维蛋白原和FⅧ:C的回收率分别为83.55%和81.67%,比常规亚甲蓝/荧光光化学法显著提高(P＜0.01),而且凝血酶原时间延长值在正常允许值范围,活化部分凝血酶时间延长值也接近正常允许值范围.加入抗坏血酸和色氨酸可灭活病毒,而甘露醇不能.结论在亚甲蓝光化学法中,抗坏血酸不影响病毒的灭活,而且对部分凝血因子有保护作用.因此,抗坏血酸可以有效提高单份冷冻新鲜人血浆的质量.
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光化学法诱导大鼠海马梗死的一种新模型
缺血性脑血管疾病是危害人类健康的常见病、多发病,患者常出现学习记忆障碍并持久存在,而海马是大脑中参与学习、记忆的重要核团.光化学法作为近年来制备脑血栓模型的一种新方法,应用于海马梗死的制备尚未见报道.本研究即探索应用光化学法原理制备海马局灶性梗死模型的方法,并对模型进行梗死体积测定,以寻求适的光敏剂浓度,从而建立满意、稳定的局灶性海马梗死模型.
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光化学法建立视网膜分支静脉阻塞大鼠模型及相关研究
目的:观察光化学法构建视网膜分支静脉阻塞(branch retinal vein occlusion, BRVO)大鼠模型的自然病程和不良事件.方法:选取30只SD(Sprague Dawley)大鼠尾静脉注射孟加拉红1min后,532nm激光(80mW,100μm,100ms)于视盘颞侧视网膜静脉二级分叉处进行单光点光凝50点建立BRVO模型.分别于1、3、5、7、10、14和21d检测全视野视网膜电图(electroretinogram,ERG)、荧光素眼底血管造影(fundus fluorescein angiography, FFA)和相干光断层扫描(optical coherence tomography,OCT).于1、5和21d各时间点随机处死2只大鼠行HE病理和血管内皮生长因子-a(vascular endothelial growth factor-a,VEGF-a)免疫组化染色.结果:光凝后,3只大鼠死亡,3只严重出血导致视网膜大部分脱离,1只出现视网膜凹陷,1只白内障.FFA和眼底(荧光)彩照发现BRVO大鼠模型造模成功率为73%(22/30),1d时近端变粗,远端变细,3~7d光凝血管完全再通.ERG示光凝1d后暗适应3.0反应b波降低至正常眼的0.694±0.042倍,5 ~7d下降至低点约为正常眼0.487 ± 0.064倍,之后开始上升,21d 上升至初始值0.708±0.0465倍.OCT和HE病理切片分别于在体和离体水平发现第1d视网膜节细胞层和外核层水肿,3 ~5d水肿消失且激光光凝点视网膜附近250μm外核层开始凋亡变薄,到21d外核层变薄只剩3~4层细胞.免疫组化发现激光光凝部位VEGF-a第1d表达水平大于光凝前,第5d光凝处VEGF-a表达量无明显差异,21d光凝处VEGF-a表达略低于光凝前.结论:激光光凝制作 BRVO 模型是一种切实可行的方法,其疾病的演变和发展可以部分模拟人体BRVO的进程.同时由于造模成功率较低以及激光光凝相关并发症较多,在实际使用中有待进一步改进方法.
关键词： 视网膜分支静脉阻塞 光化学法 自然病程 不良事件 血管内皮生长因子-A -
叶绿素光敏剂诱导大鼠脑梗死模型
目的观察光敏剂叶绿素光化学诱导的大鼠脑梗死模型. 方法大鼠60只随机分为8组:单纯光照组,单纯光敏剂组及6组不同光敏剂浓度(10, 20, 30, 40, 50和60 mg.kg-1)的光化学诱导组,不同的光敏剂浓度光化学诱导组给予静脉注射叶绿素衍生物四号(chlorophyll derivative IV, CPD4) 10 min后,He-Ne激光照射左侧大脑上下肢感觉、运动区,24 h后观察其神经行为学、梗死面积及组织病理学改变,以评估模型的可行性. 结果 CPD4 40, 50 mg.kg-1经He-Ne激光照射,可诱导大鼠脑梗死,且面积恒定,神经行为学评分及病理形态学改变明显. 结论 CPD4诱导的大鼠脑梗死模型稳定性,重复性好,梗死成功率高.
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高分子医用材料表面固定生物分子
综述了在高分子医用材料表面固定生物分子的方法,包括等离子固定方法、光化学方法等.这些方法适用的生物分子有蛋白质如白蛋白,多糖类如肝素,以及其它酶等.经改性的高分子材料可获得良好的生物相容性和多种优良的生物医学应用性能.
