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mPDL-1IgV文献资料
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小鼠PDL1胞外区的克隆、表达及生物学效应研究
目的:克隆小鼠PDL1膜外区(简称mPDL-1IgV)基因,构建原核表达载体,检测其表达和生物学活性.方法:提取小鼠脾细胞总RNA,采用RT-PCR克隆mPDL-1IgV基因,并将其克隆到原核表达载体pET28a(+)中,构建原核表达质粒pET28a(+)/rap.DL-1IgV,转化大肠杆菌DH5et,进行PCR和双酶切鉴定,并测序.筛选阳性菌落,提取质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳和Westemblot检测分析,同时纯化mPDL-1 IgV蛋白,进行生物学活性检测.结果:从小鼠脾细胞总RNA中成功获得mPDL-1IgVcDNA克隆,重组质粒pET28a(+)/mPDL-1IgV构建正确.转化pET28a(+)/mPDL-1 IgV的E.coli BL21(DE3)成功诱导性表达重组小鼠PDL-1胞外区蛋白,并纯化mPDL-1IgV蛋白,对其进行了复性和浓缩,复性后的蛋白显示出良好的生物学活性.结论:成功地克隆、表达和纯化了小鼠PDL1胞外区蛋白,为进一步研究其功能提供了条件.
