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超声微泡造影剂促进GFP质粒转染喉癌细胞的效果
目的:观察超声微泡造影剂促进GFP质粒转染喉癌细胞的可行性及有效性.方法:将喉癌细胞随机分成4组,分别为A组:空白对照组(PBS);B组:GFP+微泡组;C组:GFP+超声组;D组:GFP+超声+微泡组,转染48h后,采用Western blot和RT-PCR检测喉癌细胞中GFP蛋白和mRNA的表达.结果:通过超声照射微泡造影剂促进GFP质粒转染喉癌细胞,D组中GFP蛋白和mRNA的表达量明显高于其他3组(P＜0.05),这说明D组的转染效率明显高于其余3组.结论:微泡在一定频率和强度的超声作用下能够安全、有效地将GFP质粒转染喉癌细胞.
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GFP质粒电转染SGC7901/ADM细胞的研究
目的 以电穿孔法,将GFP质粒转染SGC7901/ADM细胞,优化转染条件以得到较高的转染率.方法 在400μl电转染体系中,以不同的电场强度(150V、180V、210V和240V),脉冲时间(5ms、25ms、50ms和75ms),电场强度和脉冲时间(150V,75ms;180V,50ms;210V,25ms;240V,5ms),分别将GFP质粒电转染SGC7901/ADM细胞,并检测不同条件下细胞的存活率和转染率.结果 180V/50ms和210V/25ms的条件下,均能取得较好的电转染效果.
关键词： 电转染 SGC7901/ADM细胞 GFP质粒 -
GFP评价Non-stop变异对蛋白的影响
目的 通过构建的non-stop绿色荧光蛋白(GFP)质粒,了解non-stop变异对GFP的影响.方法 使用T4连接酶将合成的含有点突变的DNA短片段插入质粒pEGFP-C1生成non-stop GFP.通过荧光显微镜及Western blot观察non-stop GFP的变化.结果 non-stop GFP蛋白量少于正常GFP蛋白量,只有正常GFP条带蛋白量的12.6％.同时,non-stop GFP蛋白分子量约大于正常GFP 8 000 Mr.结论 non-stop变异使GFP持续翻译至poly(A),同时加速了蛋白的衰减.
关键词： non-stop变异 GFP质粒 蛋白衰减
