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高效液相色谱法同时测定保健食品中的安石榴甙和鞣花酸
目的 建立同时测定保健食品中安石榴甙、鞣花酸的高效液相色谱法(HPLC)方法.方法 采用迪马钻石Ⅱ(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,乙腈+0.2％磷酸水溶液为流动相梯度洗脱,在波长256 nm下进行检测.结果 方法的线性范围:α安石榴甙24～240μg/ml;β安石榴甙56.0～ 560 μg/ml;鞣花酸60.0～600 μg/ml.相关系数r为0.999 7～0.999 9;检出限:α安石榴甙、β安石榴甙、鞣花酸分别为2.36、2.78、2.67μg/g;定量限:7.08、8.34、8.01μg/g.高低两个浓度水平加标回收率97.5％～104％;相对标准偏差(RSD)均＜2.5％.结论 本方法简便、快速、准确、重现性好,适用于保健食品中安石榴甙和鞣花酸的测定.
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安石榴甙对LPS诱导的小鼠急性肺损伤的保护作用
目的：探讨安石榴甙在LPS 诱导的急性肺损伤中的保护作用。方法：腹腔注射20 mg／kg 体重的LPS（脂多糖）制备ALI（急性肺损伤）小鼠模型，诱导小鼠急性肺损伤。随机将60只小鼠分为6组，每组10只：正常对照组，LPS 组，LPS＋安石榴甙组（10、20、40 mg／kg 体重），LPS＋地塞米松组。安石榴甙和地塞米松均在注射LPS 前2 h 腹腔注射给药，然后小鼠再腹腔注射致死量的LPS，正常对照组小鼠只给予腹腔注射等体积的PBS。HE 染色，观察小鼠肺组织在不同处理条件下的病理变化和肺损伤程度；称量小鼠湿肺、干肺重量，观察小鼠的肺水肿程度；检查肺组织匀浆中的MPO（髓过氧化物酶活性）活性情况，分析中性粒细胞的活化和浸润情况；计数肺泡灌洗液中的细胞总数和炎症细胞的数量，ELISA 检测肺泡灌洗液中炎性细胞因子的浓度，分析安石榴甙对炎症反应的影响。结果：小鼠肺组织HE 染色结果发现，LPS 诱导的肺组织炎性细胞浸润，间质水肿和肺实质的损伤均明显减轻。不同剂量的安石榴甙可以显著减低ALI 小鼠中湿肺／干肺重量比（P＜0．05）。说明安石榴甙可以减轻ALI 导致的肺组织渗出、水肿。不同剂量的安石榴甙可以显著减少肺泡灌洗液中的炎症细胞总数以及中性粒细胞和巨噬细胞的数量（P＜0．05）。安石榴甙可明显降低肺泡灌洗液中的细胞因子IL－6、IL－12、TNF－α和IL－1β的浓度（P＜0．05）。MPO 的活性检测表明，安石榴甙减少了LPS 诱导的中性粒细胞在肺组织中的浸润。结论：安石榴甙在LPS 诱导的急性肺损伤中具有明显的保护作用。
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安石榴甙在机械力诱导成纤维细胞凋亡中的作用及其机制研究
目的:探索安石榴甙(PUN)在机械力诱导成纤维细胞凋亡中的作用及其可能机制.方法:不同浓度(0、2.5、5、10、25、50、100 μmol/L)的PUN处理L929细胞不同时间(12、24、48小时)后,采用CCK8法检测细胞增殖活性;采用Western blot检测不同浓度PUN(0、2.5、5、10、25 μmol/L)处理24小时后Nrf2蛋白表达;将L929细胞根据是否行PUN(10μmol/L,24小时)预处理和是否采用四点弯曲力学加载系统进行机械力干预(5333 μstrain,1 Hz,4小时)分为4组:空白对照组、加力组、PUN组及PUN加力组,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率;采用Westem blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及caspase3的表达;采用H2DCF-DA荧光探针检测各组细胞内活性氧簇(ROS)水平的变化.结果:PUN在浓度10 μmol/L、作用时间24小时对细胞增殖活性及Nrf2蛋白表达的促进作用显著;与对照组相比,加力组细胞凋亡率明显增加、ROS水平显著上升、Bax表达和Active-caspase3/caspase3比率明显增加(P＜0.05);与加力组相比,PUN加力组细胞凋亡率显著减少、ROS水平明显降低、Bcl2表达显著增加、Bax表达和Active-caspase3/caspase3比率降低(P＜0.05).结论:PUN可明显减少机械力诱导的成纤维细胞凋亡,其机制可能是通过上调抗氧化蛋白Nrf2的表达,从而抑制机械力诱导ROS水平上升所导致的氧化损伤.
