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重组猪卵透明带-3β截短型蛋白的同源建模
目的:分析重组猪卵透明带-3β截短型蛋白(tunc-pZP3β)的结构,以及重组蛋白中产生强免疫原性的氨基酸序列的抗原表位.方法:利用生物信息学方法分析tunc-pZP3β的序列信息,并同源建模tunc-pZP3β的三维结构,分析抗原表位.结果:建立了tunc-pZP3β的模拟三维结构,显示出两段目的抗原表位氨基酸序列位于蛋白表面.结论:tunc-pZP3β从理论上保留着抗原表位.
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非融合膜外型猪卵透明带-3β蛋白在原核系统中的表达
目的:通过基因工程的方法在原核表达系统中表达去除了信号肽和跨膜区的膜外型猪卵透明带蛋白pZP3β.方法:设计适宜引物,采用PCR方法,在基因水平对膜外型pZP3β的翻译起始序列进行适当调整,获得的基因克隆入pET-3c载体,并进一步在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)pLysS中表达.结果:得到表达率约10%的非融合膜外型pZP3β蛋白的表达,并经Western-blot鉴定为目的蛋白.结论:外源蛋白在不改变氨基酸序列条件下,在基因水平的适当调整可以有效提高其表达率.
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翻译起始区突变对猪卵透明带-3β蛋白在E.coli表达的影响
目的:探讨翻译起始区(translationinitiation region,TIR)突变对两种氨基酸序列长度不同的猪卵透明带蛋白pZP3β161和pZP3β 263在大肠杆菌中表达的影响.方法:应用DNASIS软件辅助分析,分别设计5条不同的上游引物对两种pZP3β基因的TIR区的G+C含量和自由能进行合理调整,PCR扩增后将获得的基因片段克隆入pET-3c载体,于大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中诱导表达.结果:TIR对pZP3β表达有明显的影响,其表达的pZP3β 161蛋白和pZP3β 263蛋白分别占菌总蛋白的25%和15%.结论:在不改变氨基酸的条件下,通过对目的基因TIR进行适当改造,能够有效提高目的蛋白的表达效率.
关键词： 猪卵透明带 截短型 翻译起始区(TIR) 基因表达
