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苦参碱可抑制Th17所诱导的角质形成细胞IL-17RA、IL-21R及IL-22R1的表达
目的 考察苦参碱(matrine,Mat)对Th17诱导的角质形成细胞(keratinocytes,KC)系HaCaT细胞白细胞介素-17受体A(IL-17RA)、白细胞介素-21受体(IL-21R)及白细胞介素-22受体1(IL-22R1)表达的影响.方法 培养HaCaT细胞,用Th17分泌的主要效应因子IL-17A(10 ng/mL)、IL-21(10 ng/mL)及IL-22 (10 ng/mL)联合刺激HaCaT细胞模拟类银屑病样细胞模型,再用10 tμg/mL及100 μg/mL的Mat干预此细胞模型,采用RT-qPCR及Western blot方法检测IL-17RA、IL-21R及IL-22R1的表达变化.结果 IL-17RA、IL-21R及IL-22R1的mRNA及蛋白在HaCaT细胞上有表达.IL-17A、IL-21及IL-22联合刺激可以显著促进HaCaT细胞IL-17RA、IL-21R mRNA及蛋白表达,IL-22R1蛋白的表达量升高(P＜0.05).Mat单独干预或与上述细胞因子联合干预组与未处理的HaCaT细胞组相比,IL-17RA、IL-21R及IL-22R1表达无显著下降(P＞0.05),但可以显著降低IL-17A、IL-21及IL-22联合刺激后所升高的受体蛋白表达(P＜0.05).结论 IL-17A、IL-21及IL-22联合刺激角质形成细胞可以增强IL-17RA、IL-21R及IL-22R1的表达,Mat可抑制这种增强作用,可能在多种Th17介导的免疫性皮肤病中发挥抗炎作用.
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白细胞介素17受体A在非小细胞肺癌中的表达及其与预后的关系
目的：研究白细胞介素17受体 A（Interleukin-17 receptor type A，IL-17RA）在非小细胞肺癌中的表达及其与预后的关系。方法收集2010年1月1日－2013年12月31日在新疆医科大学附属肿瘤医院胸外科接受标准肺癌根治术且随访资料完整的131例肺鳞癌和腺癌患者的术后标本，采用免疫组织化学法检测癌组织、癌旁组织中 IL-17RA 的表达情况。Kaplan-Meier 法比较癌组织 IL-17RA 高表达和低表达对患者3年无病生存期（Disease-free survival，DFS）的影响。结果IL-17RA 在癌组织的表达高于癌旁组织（P ＜0．001）；IL-17RA 的表达与病理类型、肿瘤直径和术后病理分期（pTNM stages，pTNM）有关（P ＜0．05）；生存分析显示，癌组织 IL-17RA低表达患者的 DFS 均优于 IL-17RA 高表达者（P ＝0．032）；COX 回归分析结果显示，IL-17RA 阳性表达是肺鳞癌、腺癌患者 DFS 的重要影响因素（P ＝0．041，HR＝1．683）。结论IL-17RA 表达是非小细胞肺癌患者独立预后因素，高表达提示预后差。
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IL-17RA基因过表达慢病毒载体的构建及鉴定
目的 构建白介素17受体A(IL-17RA)基因过表达慢病毒载体.方法 采用聚合酶链反应(PCR)扩增制备IL-17RA cDNA;将IL-17RA cDNA连接于用Age1酶切消化获得的线性化GV358载体;对PCR法鉴定为阳性克隆的IL-17RA-GV358载体进行测序;将IL-17RA-GV 358载体用pHelper 1.0和pHelper 2.0共转染到293T细胞获得IL-17RA慢病毒包装,运用荧光法行滴度检测;用IL-17RA-GV358重组慢病毒转染293T细胞,观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,运用RT-PCR、Western blot检测IL-17RA mRNA及蛋白的表达.结果 IL-17RA-GV358重组慢病毒转染293T细胞后可观察到荧光,结果显示在稳定转染的细胞中IL-17RA mRNA及蛋白的表达水平较未转染细胞显著增高.结论 成功构建IL-17RA-GV358慢病毒载体,为IL-17RA基因的后期研究提供了实验基础.
