首页 > 文献资料
-
R-藻红蛋白荧光标记单克隆抗体的研制
目的研究国产R-藻红蛋白标记二抗的工艺,对异双功能试剂的用量进行比较实验.方法不同稀释度的异双功能试剂SMCC处理R-PE使之衍生化,SPDP与二抗反应使之衍生化再经DTT处理从而给二抗引入外源巯基.将二者混合反应完成交联.结果 SMCC与R-PE的摩尔比为56:1时,交联物的R-PE与抗体结合比接近1:1,R-PE与抗体的利用率高.结论以本文所述工艺进行藻红蛋白的荧光标记,交联物荧光强度较高、交联抗体活性损伤很小.
-
竞争性酶免疫法检测人布鲁氏杆菌(摘要)
检测布鲁氏杆菌常用的血清学方法为凝集实验和补体结合实验(CFT)，其准确性和灵敏度有待提高，间接酶联免疫实验灵敏度高，但易产生假阳性，且试剂的标准化较困难。本文介绍一种快速、简便，灵敏度高，特异性好的竞争性酶免疫法(CELISA)。 方法布鲁氏杆菌S-LPS抗原用0.06 mol/L NaHCO3缓冲液(pH 9.6)稀释后，反应板每孔加100 μl，4 ℃过夜(18 h)包被。用含0.05% Tween-20的0.01 mol/L磷酸盐缓冲液(pH 7.2)洗涤4次，加入95 μl鼠单克隆抗体(用含0.015 mol/L EDTA-EGTA的PBS液稀释)，再加5 μl待检或对照血清。置微型振荡器轻振5 min，放室温反应30 min，洗4次，加标记有过氧化物酶的羊抗鼠抗体，振动5 min，置室温反应30 min，洗4次，后加100 μl显色基质，振动反应10 min，以100 μl基质作空白对照，414 nm波长比色。如血清中无抗布鲁氏菌抗体，鼠单克隆抗体被结合，有颜色产生；如血清中有该抗体，则与鼠单抗竞争结合位点，抑制颜色的产生，颜色的深度与抗体浓度呈负相关。检测结果以鼠单抗受到抑制的百分比表示：计算公式＝［100-(标本的A值/结合对照的A值)×100%］。 结果 341例无症状者血清，用常规法CFT、TAT(标准管凝集试验)测得为阴性，用本法检测，当Cutoff值分别为28%和30%时，其特异性为99.7%和100%。对116例常规法检测或细菌培养为阳性的标本，Cutoff值为28%和30%时，本法检测的灵敏度各为98.3%和94.8%。提示Cutoff值提高，方法的特异性增加而灵敏度下降，将其值设为28%，此时可获得较好的特异性和灵敏度。51例细菌培养为阳性的标本，本法检测亦全部阳性，而CFT法灵敏度为92%；31例用常规法检测为阴性而有布鲁氏病症状者，本法特异性达100%。 作者认为CELISA法具有简便、快速、交叉反应少，试剂易于标准化的特点，用该法检测人布鲁氏杆菌有良好的适用性，并可作为确诊实验。
