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在活化硝酸纤维素膜上的R-藻红蛋白荧光免疫测定
目的提高普及型藻胆蛋白荧光标记诊断试剂盒的检测灵敏度. 方法采用化学方法活化处理硝酸纤维素膜,以R-藻红蛋白为荧光标记物,对比活化膜与未经处理的硝酸纤维素膜用于双抗体夹心法检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的效果及稳定性 . 结果普通膜和活化膜与进口ELIS A试剂对比,120份标本的阴阳性符合率达100%,特异性好;活化膜的检测灵敏度高于普通膜 . 结论活化的硝酸纤维素膜有效地提高了藻胆蛋白荧光标记诊断试剂检测的灵敏度.
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R-藻红蛋白荧光标记单克隆抗体的研制
目的研究国产R-藻红蛋白标记二抗的工艺,对异双功能试剂的用量进行比较实验.方法不同稀释度的异双功能试剂SMCC处理R-PE使之衍生化,SPDP与二抗反应使之衍生化再经DTT处理从而给二抗引入外源巯基.将二者混合反应完成交联.结果 SMCC与R-PE的摩尔比为56:1时,交联物的R-PE与抗体结合比接近1:1,R-PE与抗体的利用率高.结论以本文所述工艺进行藻红蛋白的荧光标记,交联物荧光强度较高、交联抗体活性损伤很小.
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荧光染料R-藻红蛋白标记小鼠抗人CD4单克隆抗体
以R-藻红蛋白(R-PE)标记小鼠抗人CD4单克隆抗体,形成单色或和用其他荧光染料标记的CD系列单抗组成双色、多色的荧光试剂,应用于流式细胞仪检测分析.用异双功能交联试剂SPDP和SMCC分别活化R-PE和CD4单抗,用DTT使经SPDP活化后的R-PE巯基化,再与用SMCC活化的CD4单抗交联.使用NEM终止交联反应,经Sephacryl S-300柱在AKTA FPLC快速液相色谱系统(简称AKTA)监测下分离纯化.结果用R-PE标记的抗CD4单抗,检测正常人外周血淋巴细胞表面CD4抗原的表达,经流式细胞仪(简称FACS)分析表明,R-PE标记的CD4抗体特异性保持完好,荧光强度较高,还可与用FITC标记的其它CD系列单抗配伍成双标或多标试剂.使用SPDP,SMCC异双功能交联试剂和DTT还原剂,成功地偶联了R-藻红蛋白和CD4单克隆抗体,可应用于流式细胞仪检测分析.
关键词： R-藻红蛋白 小鼠抗人CD4单克隆抗体
