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轴突导向因子-1对糖尿病大鼠视网膜Müller细胞活化的影响
目的 观察外源性轴突导向因子-1(netrin-1)对糖尿病(DM)大鼠视网膜Müller细胞活化的影响.方法 健康清洁级雄性Sprague-Dawley大鼠50只,采用随机数字表法随机分为正常对照组(A组)、正常+平衡盐溶液(BSS)组(B组)、正常+netrin-1100μg/ml组(C组)、DM+BSS组(D组)、DM+netrin-1100μg/ml组(E组),每组10只.D、E组大鼠按60 mg/kg的剂量,左下腹腔注射链脲佐菌素诱导DM动物模型.采用免疫组织化学染色法检测大鼠视网膜Müller细胞标志物胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的阳性表达;荧光定量聚合酶链反应检测大鼠视网膜GFAP mRNA的表达.结果 免疫组织化学染色结果显示,A~C组大鼠视网膜仅在神经纤维层及神经节细胞层可见少量GFAP阳性表达.D组大鼠视网膜GFAP阳性表达增多.E组大鼠视网膜GFAP阳性表达较D组减少.A~E组大鼠视网膜GFAP阳性表达、mRNA表达比较,差异有统计学意义(F=203.43、72.91,P=0.00、0.00).与A组比较,D组大鼠视网膜GFAP阳性表达、mRNA表达明显增多,差异有统计学意义(t=-26.01、22.26,P=0.00、0.00).E组大鼠视网膜GFAP阳性表达、mRNA表达较D组明显下降(t=-10.78、3.93,P=0.00、0.00),但仍高于A组(t=7.00、-9.82,P=0.00、0.00),差异均有统计学意义.A、C组大鼠视网膜GFAP阳性表达、mRNA表达比较,差异均无统计学意义(t=-0.29、0.50,P=0.77、0.62).结论 Netrin-1可降低DM大鼠视网膜Müller细胞活化,减少视网膜GFAP表达.
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芬戈莫德对视网膜光损伤大鼠光感受器细胞及小胶质细胞的影响
目的 观察芬戈莫德(FTY720)对视网膜光损伤大鼠光感受器细胞及小胶质细胞的影响.方法 Sprague-Dawley大鼠120只随机分为正常组、模型组、溶媒组和FTY720组,每组30只.正常组大鼠不予处理;模型组、溶媒组和FTY720组大鼠建立光损伤动物模型.模型组大鼠仅接受光照.FTY720组大鼠建模前腹腔注射FTY720,溶媒组大鼠注射50％二甲基亚砜.光照后6h及1、3、7d,采用流式细胞仪检测大鼠小胶质细胞所占比例;酶联免疫吸附试验检测大鼠视网膜中白细胞介素(IL)-1β的含量.光照后1d,采用原位末端标记法检测光感受器细胞凋亡情况.光照后7d,采用苏木精-伊红染色观察大鼠视网膜形态结构.结果 大鼠视网膜中小胶质细胞所占比例及IL-1β含量均于光照后6h开始升高,光照后3d达高峰,光照后7d开始下降.光照后6h及1、3、7d,FTY720组大鼠视网膜中小胶质细胞所占比例及IL-1β含量较正常组升高,较模型组、溶酶组明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).光照后1d,正常组、模型组、溶酶组及FTY720组大鼠视网膜凋亡细胞比例分别为0、(87.66±2.50)％、(86.00±2.44)％、(49.66±2.80)％.FTY720组大鼠视网膜凋亡细胞比例较正常组升高,较模型组、溶酶组明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).光照后7d,正常组大鼠视网膜结构清晰,细胞排列整齐;溶酶组、模型组大鼠视网膜结构不清楚,细胞排列紊乱,外核层明显变薄;FTY720组大鼠视网膜结构清晰,外核层厚度较溶酶组、模型组厚,但薄于正常组.结论 FTY720能抑制视网膜光损伤大鼠光感受器细胞的凋亡及小胶质细胞的活化.
关键词： 光刺激/副作用 小神经胶质细胞/生理学 光感受器细胞/生理学 -
糖尿病大鼠早期视网膜小胶质细胞活化与神经节细胞损害的关系
目的 观察糖尿病早期视网膜小胶质细胞的活化特征与视网膜神经节细胞(RGC)损害的关系.方法 20只成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,采用链脲佐菌霉素腹腔注射方法制作糖尿病动物模型,分为糖尿病1、3个月组及相应正常对照组,每组5只大鼠.对所有大鼠行上丘定位注射逆行标记RGC,分别用免疫组织化学法标记视网膜铺片、冰冻切片小胶质细胞和RC-C,共聚焦显微镜下观察小胶质细胞细胞形态及分布特征.结果 糖尿病组视网膜铺片小胶质细胞胞体增粗,形态不规则.与对照组相比,糖尿病3个月组RGC层发生吞噬的小胶质细胞密度显著增加(t=3.83,P<0.01).与对照组相比,糖尿病大鼠1、3月个组RGC层小胶质细胞平均密度均显著增加(t=2.71,4.22;P<0.05);糖尿病大鼠3个月组RGC层小胶质细胞平均密度较糖尿病1个月组显著增加(t=7.45,P<0.0001).糖尿病早期小胶质细胞与RGC数量之间存在相关关系(r=0.9,P<0.05).结论 糖尿病早期小胶质细胞活化与RGC损伤关系密切.
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Müller细胞生理功能及其在糖尿病视网膜病变中的变化
Müller细胞接触并包裹视网膜神经元细胞体和突触,对视网膜神经元的功能及代谢起到支持作用;对维护视网膜细胞外环境的稳定,如离子、水平衡和血视网膜屏障(BRB)等具有重要调控作用;可释放神经胶质递质和刺激性神经物质,通过对神经递质的再吸收循环,为视网膜神经元提供神经递质前体进而影响神经突触的活性.此外,Müller细胞对病理刺激能够产生反应.该反应一方面具有视网膜神经元保护作用,如分泌神经营养因子、吸收降解兴奋性毒素、分泌抗氧化剂等,另一方面也可引起视网膜神经元谷氨酸盐代谢紊乱和离子平衡紊乱,导致视网膜水肿和神经元变性损伤.Müller细胞对糖尿病视网膜病变(DR)的发生发展具有重要影响.DR可引起Müller细胞增生,除造成谷氨酸盐代谢紊乱外,还会引起Müller细胞大量分泌炎症介质和血管内皮生长因子等破坏BRB.深入研究Müller细胞,对探讨DR的发病及防治具有重要意义.针对Müller细胞靶向转染的腺病毒载体研制成功,利用两亲肽携带蛋白或抗体直接转染细胞达到抑制DR的效果,这些方法为早期防治DR提供了新的途径.
关键词： 糖尿病视网膜病变/病因学 小神经胶质细胞/生理学 综述 -
轴突导向因子netrin-1对早期糖尿病大鼠胶质细胞活化的影响
正常生理情况下,胶质细胞对视网膜起支撑、营养作用,胶质细胞终板还参与血视网膜屏障(BRB)的构成[1].研究表明,胶质细胞活化和功能障碍是糖尿病视网膜病变(DR)BRB受损的关键因素[2,3];其活化改变的发生早于微血管病变[4],是早期DR神经改变的重要表现[5].在DR早期,干预胶质细胞活化及神经元变性和微血管异常对阻止DR进展有重要意义[5].轴突导向因子netrin-1是一种分泌蛋白[6],在神经发育及细胞迁移中发挥双重导向功能,同时对血管生成也发挥重要作用[7].我们前期研究结果证实,netrin-1对糖尿病(DM)大鼠BRB有保护作用[8],但其机制是否为影响胶质细胞活化尚不清楚.为此,我们进一步观察了外源性netrin-1玻璃体腔注射后DM大鼠视网膜胶质细胞活化的改变情况.现将结果报道如下.
