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高糖缺氧环境下转甲状腺素蛋白对人视网膜血管内皮细胞生长抑制作用机制
目的 探讨高糖缺氧环境下转甲状腺素蛋白(TTR)对人视网膜血管内皮细胞(hREC)生长抑制作用的机制.方法 将hREC分为正常组、高糖组、正常缺氧组、高糖缺氧组、正常+TTR组、高糖+TTR组、正常缺氧+TTR组及高糖缺氧+TTR组,各组细胞均置于Dulbecco改良Eagle培养基中培养.正常组、正常缺氧组培养基中加入5.5 mmol/L葡萄糖;高糖组、高糖缺氧组培养基中加入25.0 mmol/L葡萄糖;正常缺氧组、高糖缺氧组培养基中加入200μmol/L氯化钴;正常+TTR组、高糖+TTR组、正常缺氧+TTR组及高糖缺氧+TTR组除高糖及缺氧诱导外,于细胞贴壁后再加入4μmol/L TTR.采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞磷酸激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)及Bcl-2相关X蛋白(Bax)的蛋白表达量.结果 正常缺氧组较正常组(χ2=25.360)、高糖缺氧组较高糖组(χ2=17.400)、高糖缺氧+TTR组较高糖缺氧组(χ2=9.900)均表现为细胞凋亡率明显增加,差异有统计学意义(P<0.05).正常组与高糖组(χ2=0.010)、正常组与正常+TTR组、高糖组与高糖+TTR组、正常缺氧组与正常缺氧+TTR组之间细胞凋亡率比较,差异均无统计学意义(P>0.05).Western blot检测结果显示,各组Akt蛋白表达比较,差异无统计学意义(F=2.450,P>0.05).正常缺氧组较正常组(t=9.406、5.306、4.819、-4.503)、高糖缺氧组较高糖组(t=8.877、7.723、6.500、-14.646)均表现为p-Akt、eNOS、Bcl-2蛋白表达量明显减少,Bax蛋白表达量明显增加,差异有统计学意义(P<0.05).与正常缺氧组比较,正常缺氧+TTR组p-Akt蛋白表达量增加(t=-5.024,P<0.05),差异有统计学意义(P<0.05);eNOS、Bcl-2、Bax蛋白表达量无明显变化,差异无统计学意义(t=-2.235、-2.656、-0.272,P>0.05).与高糖缺氧组比较,高糖缺氧+TTR组p-Akt、Bcl-2蛋白表达量明显减少(t=4.355、4.308),Bax蛋白表达量明显增加(t=-4.311),差异有统计学意义(P<0.05);eNOS蛋白表达量无明显变化,差异无统计学意义(t=-1.590,P>0.05).高糖组与正常组、正常+TTR组与正常组、高糖+TTR组与高糖组之间p-Akt、eNOS、Bcl-2、Bax蛋白表达量比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 高糖缺氧环境下TTR对hREC生长抑制作用的机制与Akt/Bcl-2/Bax信号通路有关,而与Akt/eNOS信号通路无关.
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精氨酸酶抑制剂对体外高糖培养的恒河猴视网膜微血管内皮细胞的保护作用
目的 观察精氨酸酶(Arg)抑制剂N羟基-正-L精氨酸(nor-NOHA)对体外高糖培养的恒河猴视网膜微血管内皮细胞(RF/6A细胞)的保护作用.方法 体外培养RF/6A细胞,并将其分为正常对照组(A组)、高糖对照组(B组)、高糖+nor-NOHA处理组(C组)、高糖+二甲基亚砜(DMSO)对照组(D组).A组细胞以5.5 mmol/L葡萄糖继续培养;B～D组以25.0 mmol/L葡萄糖继续培养,C、D组分别加入125 mg/L的nor-NOHA及1％DMSO.采用噻唑蓝比色法、Transwell小室法和体外成管实验分别检测各组RF/6A细胞增生、迁移和管腔形成能力.采用荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组RF/6A细胞中ArgⅠ、内皮型一氧化氮(NO)合酶(eNOS)、诱导型NO合酶(iNOS)的mRNA相对表达量.采用酶链免疫吸附测定试验(ELISA)检测各组RF/6A细胞培养上清液中NO和白细胞介素(IL)-1b的分泌量.结果 B组RF/6A细胞增生、凋亡及管腔形成能力较A组明显降低,差异有统计学意义(t=2.367、5.633、7.045,P＜0.05);C组RF/6A细胞增生、凋亡及管腔形成能力较B组提高,差异有统计学意义(t=5.260、6.952、8.875,P＜0.05).RT-PCR检测结果显示,与A组比较,B组RF/6A细胞中Arg Ⅰ、iNOS mRNA相对表达量升高(t=6.836、3.342),C组RF/6A细胞中Arg Ⅰ、iNOS mRNA相对表达量降低(t=4.904、7.192),差异均有统计学意义(P＜0.05);B组RF/6A细胞中eNOS mRNA相对表达量降低(t=4.165),C组RF/6A细胞中eNOSmRNA相对表达量升高(t=6.594),差异均有统计学意义(P＜0.05).ELISA检测结果显示,与A组比较,B组RF/6A细胞培养上清液中NO分泌量减少(t=4.925),C组RF/6A细胞培养上清液中NO分泌量增多(t=5.368),差异均有统计学意义(P＜0.05);B组RF/6A细胞培养上清液中IL-1b分泌量增多(t=5.032),C组RF/6A细胞培养上清液中IL-1b分泌量减少(t=7.792),差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 nor-NOHA对体外高糖培养的RF/6A细胞有保护作用,可提高其增生、迁移及管腔形成能力;其机制可能是通过平衡Arg/NOS的表达从而抑制氧化应激反应.
关键词： 精氨酸酶/拮抗剂和抑制剂 视网膜血管/细胞学 内皮细胞/生理学 细胞 培养的 -
转甲状腺素蛋白对视网膜微血管内皮细胞生物学行为的影响
目的：观察转甲状腺素蛋白(TTR)对视网膜微血管内皮细胞(RMVEC)生物学行为的影响。方法培养的 RMVEC 依照 TTR 浓度不同分为0(初始浓度)、4μmol/L 组。培养48 h 后,噻唑蓝(MTT)比色法、细胞迁移实验分别检测不同浓度 TTR 对 RMVEC 增生、迁移的影响。细胞划痕实验检测培养0(初始时间)、24、48 h 时细胞损伤愈合情况。结果MMT 比色法检测结果显示,初始浓度组、4μmol/L 组吸光度[A,旧称光密度(OD)]值分别为0.17±0.02、0.40±0.03。两组 A 值比较,差异有统计学意义(t =15.47,P =0.0001)。细胞迁移实验结果显示,初始浓度组、4μmol/L 组 RMVEC 向外迁移数分别为(140±7)、(227±14)个。两组间 RMVEC 向外迁移数比较,差异有统计学意义(t=5.44,P =0.0006)。细胞划痕实验结果显示,初始时间各组细胞划痕距离大致相等；24 h,初始浓度组、4μmol/L 组细胞划痕愈合距离分别为(134.4±45.4)、(330.0±23.1)μm。两组细胞划痕愈合距离比较,差异有统计学意义(t =8.25,P <0.01)。48 h,4μmol/L 组完全愈合,初始浓度组未愈合。结论TTR 对 RMVEC 增生、迁移和损伤愈合有明显促进作用。
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雌激素对视网膜主要细胞功能的影响
雌激素通过与雌激素受体(ER)结合而发挥生理功能,ER亚型和特异性激动剂和拮抗剂的研究进展为进一步认识雌激素作用机制提供了可能.雌激素可能通过对视网膜血管内皮细胞、色素上皮细胞、神经节细胞、光感受器细胞和Müller细胞等主要视网膜细胞功能的影响,改善血视网膜屏障、保护视网膜光感受器细胞、视神经,减轻氧化应激反应对视网膜色素上皮细胞损害.详尽研究ER各亚型在视网膜主要细胞的分布及特异性激动剂和拮抗剂对这些细胞的作用将为眼底病的防治开拓一个新的领域.
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高糖缺氧环境下转甲状腺素蛋白对视网膜血管内皮细胞的影响
目的 观察高糖缺氧环境下转甲状腺素蛋白(TTR)对人视网膜血管内皮细胞(hREC)的影响.方法 分别于5.5 mmol/L葡萄糖(低糖,LG)、25.0 mmol/L葡萄糖(高糖,HG)以及200 μmol/LCoCl2诱导的缺氧环境中培养hREC、人视网膜色素上皮细胞(hRPEC),并据此分为LG组、LG缺氧组、HG组、HG缺氧组.实时无标记细胞功能分析仪检测细胞培养初始时间(0 h)及培养后4、8、16、24、36、48、60、72 h的细胞生长指数.分别在LG组、LG缺氧组、HG组、HG缺氧组细胞培养基中添加4μmol/L TTR,即LG组+TTR、LG缺氧组+TTR、HG组+TTR、HG缺氧组+TTR,观察TTR对hREC和hRPEC的作用以及hRPEC对hREC生长的影响.Transwell共培养体系观察hPEPC对hREC生长影响.结果 培养后72 h,LG组hREC、hRPEC生长指数明显高于LG缺氧组、HG组,差异均有统计学意义(hREC:F=17.098、22.970,P＜0.05;hRPEC:F=45.442、9.011,P＜0.05);HG组、HG缺氧组hREC、hRPEC生长指数显著降低,差异均有统计学意义(hREC:F=146.184,P＜0.05;hRPEC:F=27.907,P＜0.05).HG组+TTR、HG缺氧组+TTR hREC生长指数显著低于HG组、HG缺氧组,两组hREC生长指数比较,差异有统计学意义(F=161.430、24.106,P＜0.05);LG组+TTR、LG缺氧组+TTR hREC生长指数高于LG组,LG缺氧组,两组hREC生长指数比较,差异有统计学意义(F=200.486、48.662,P＜0.05).LG组+TTR、LG缺氧组+TTR、HG组+TTR、HG缺氧组+TTR hRPEC生长指数均较LG组、LG缺氧组、HG组、HG缺氧组略高,但差异无统计学意义(P＞0.05).共培养与单独生长细胞相比,共培养hRPEC对hREC生长有显著抑制作用,差异有统计学意义(LG组:F=15.711,P＜0.05;LG缺氧组:F=45.659,P＜0.05;HG组:F=7.857,P＜0.05;HG缺氧组:F=6.348,P＜0.05).结论 高糖缺氧环境下TTR对hREC生长有抑制作用.
