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基于酪胺信号放大和金标银染的致病菌生物芯片检测方法的灵敏度评价研究
目的 对基于酪胺信号放大和金标银染技术的致病菌可视化生物芯片检测方法进行评价.方法 以伤寒沙门氏菌和痢疾志贺菌作为检测对象,建立生物芯片的TSA-金标银染高灵敏度可视化检测技术,优化试剂浓度、反应温度、温育及银染时间等检测条件,比较了TSA-金标银染与单独金标银染、TSA-金标银染与TSA-荧光的检测灵敏度.并对进口水产品样品进行了伤寒沙门氏菌和痢疾志贺菌的应用检测.结果 检测条件优化结果为:Streptavidin-HRP稀释比例为1∶1 500,Biotin-Tyramine稀释比例为1∶200+ 0.5％ H2O2,Streptavidin-Nanogold稀释比例为1∶100；温育温度37℃,温育时间20 min,银染显色时间8～10min.TSA-金标银染比单独金标银染的检测灵敏度提高10～100倍,与TSA-荧光的检测灵敏度相同,达到103 CFU/ml.检测进出口水产品样品伤寒沙门氏菌和痢疾志贺菌结果与SN标准方法检测结果一致.结论 基于酪胺信号放大和金标银染技术的致病菌可视化生物芯片检测方法,为致病菌低成本快速检测提供了新思路.
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应用直接酪胺信号放大方法显示Y染色体荧光原位杂交信号
目的 用直接酪胺信号放大(tyramine signal amplification,TSA)方法显示Y染色体荧光原位杂交信号,以提高检测脑组织切片Y染色体荧光原位杂交信号的灵敏度.方法 以小鼠Y染色体重复序列pY353/B cDNA为模板标记RNA探针,以雌性小鼠为对照,用原位杂交方法杂交Y染色体特异性基因区域,分别用直接TSA方法和"三步抗体法"显示荧光原位杂交信号.通过计数Y染色体阳性细胞核占所有细胞核的百分率来计算TSA法和"三步抗体法"检测脑组织切片Y染色体荧光原位杂交信号的灵敏度,比较分析两种方法灵敏度的差异.结果 "三步抗体法"在脑切片检测Y染色体阳性信号的灵敏度和特异度分别为85.67%和100%;直接TSA法在脑切片检测Y染色体阳性信号的灵敏度和特异度分别为92.82%和100%.结论 TSA方法检测脑组织切片Y染色体荧光原位杂交信号的灵敏度比"三步抗体"法有显著的提高,可以用于脑内追踪和分析骨髓干细胞的迁移规律.
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应用TSA-FISH技术检测宫颈上皮内瘤变和宫颈癌的HPV16整合
目的:检测人乳头瘤病毒16 (HPV16)整合阳性率在宫颈上皮内瘤变(CIN)向宫颈癌转变的过程中是否增加.方法:111例CIN和宫颈癌患者手术标本的石蜡切片,其中CIN Ⅰ组18例,CINⅡ组21例,CINⅢ组19例,宫颈癌Ⅰ期32例,宫颈癌Ⅱ期组21例,应用酪胺信号放大-荧光原位杂交(TSA-FISH)技术检测在CIN和宫颈癌石蜡切片中HPV16整合的阳性率,并进行比较.结果:CIN组阳性率为25.9％,其中CIN Ⅰ组为22.2％,CINⅡ组为23.8％,CINⅢ组为31.6％;宫颈癌组阳性率共为54.7％,其中宫颈癌Ⅰ期组为53.1％,宫颈癌Ⅱ期组为57.1％.宫颈癌组HPV16整合阳性率较CIN组增多(P=0.002).结论:在宫颈上皮内瘤变向宫颈癌转变的过程中均有HPV16整合,在宫颈癌中HPV16整合阳性率更高,宫颈癌的发生发展与HPV16的整合有相关性.应用TSA-FISH技术检测HPV16整合对宫颈癌的基础和临床研究有重要意义.
