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PBP文献资料
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耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌研究进展
鲍曼不动杆菌属人体皮肤、胃肠道、上呼吸道正常菌丛的一部分,能在医院环境中长时间存活,特别是在免疫抑制患者,可引起各种医院获得性感染,包括肺炎、尿路感染、菌血症、脑膜炎.
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DnaJ类分子伴侣PBP基因的原核表达及兔抗PBP抗体的制备
目的:在原核系统中表达DnaJ类分子伴侣感光受体外周蛋白结合蛋白(PBP)基因, 并制备兔抗PBP的抗体鉴定其特性.方法: 应用RT-PCR从人胎脑组织总RNA中扩增PBP cDNA.测序后将其克隆到表达载体pET-28a中, 并在大肠杆菌中以IPTG诱导表达.表达产物经Ni-NTA亲和层析柱纯化后, 用SDS-PAGE进行鉴定.以所获纯化的PBP免疫新西兰白兔, 制备兔抗PBP抗体.抗体的效价及特异性用Western blot进行测定和分析.结果: 扩增和克隆出了720 bp的PBP基因.构建的重组质粒pET28a-PBP在大肠杆菌中得到高表达, 诱导表达的蛋白存在于包涵体和细菌裂解上清中, 纯化的PBP经SDS-PAGE鉴定呈单一条带.以纯化的PBP免疫兔, 制备了兔抗PBP抗体.Western blot鉴定证实, 该抗体可与原核表达的PBP特异性结合, 抗体效价为1: 1 600.结论: 在原核细胞中表达了具有生物学活性的PBP, 并以其为免疫原制备了兔抗PBP的抗体, 为进一步研究PBP的结构与生物学活性奠定了基础.
