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载脂蛋白-J mRNA在实验性急性脑出血大鼠脑内的表达
目的:探讨载脂蛋白J (Apo-J) 在大鼠脑出血急性期的脑内表达及其可能的作用机制.方法:SD大鼠54只,制备脑出血模型,随机分为对照组、假手术组及脑出血后3 h组、6 h组、12 h组、1 d组、3 d组、5 d组和7 d组.检测各组的脑含水量,以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测Apo-J mRNA的含量.结果:各组均有Apo-J mRNA表达,但脑出血后各组手术侧表达明显增加(P<0.01),尤其是3 d组,与脑含水量呈正相关.结论:大鼠脑出血后Apo-J mRNA表达增加,并与脑水肿程度呈正相关,推测Apo-J起细胞保护作用的可能性大.
关键词： 载脂蛋白-J 脑出血 逆转录-聚合酶链反应 -
载脂蛋白-J质粒转染大鼠BMSCs及其在靶细胞中的表达
目的 对比pEGFP-N1-apoJ质粒在不同DNA浓度条件下转染骨髓间充质干细胞的转染率,并测定载脂蛋白-J的表达情况.方法 0.8、1.2、1.6、2.0 μg pEGFP-N1-apoJ质粒分别在脂质体的介导下转染大鼠骨髓间充质干细胞,并在荧光显微镜下观察,确定24、48、72 h时转染率,筛选出能获得高转染率的质粒的量.设置pEGFP-N1-apoJ质粒组、空pEGFP-N1质粒组、空白对照组,用蛋白免疫印迹法检测载脂蛋白-J在24、48、72h3个时间点的表达情况.结果 4个不同质粒浓度组转染率分别为:(16.7±1.0)％、(19.7±1.4)％、(30.1±3.6)％、(21.7士5.5)％,比较4个组间转染效率差异有统计学意义(P＜0.05),且1.6 μg pEGFP-N1-apoJ质粒组转率高.通过蛋白免疫印迹法检测后,3个目的蛋白灰度值与内参甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)灰度值相比较,蛋白质相对表达水平为:pEGFP-N1-apoJ质粒组1.91±0.12,空pEGFP-N1质粒组0.56士0.11,空白对照组0.57±0.17,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 质粒pEGFP-N1-apoJ可在脂质体的介导下转染入大鼠骨髓间充质干细胞,携带载脂蛋白-J基因的靶细胞可表达载脂蛋白-J.
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相关蛋白在携带载脂蛋白-J基因大鼠BMSCs中的表达及意义
目的 检测重组质粒pEGFP-N1-apoJ在不同量、不同时间条件下转染大鼠骨髓间充质干细胞的瞬时转染效率,并测定载脂蛋白-J(ApoJ)在靶细胞中能否高表达.方法 贴壁培养细胞,并用脂质体LipofectaminTM 2000分别介导0.8、1.2、1.6、2.0μg重组质粒pEGFP-N1-apoJ转染,置荧光显微镜下观察转染结果,测定在24、48、72h时间点的瞬时转染效率.蛋白免疫印迹法分别检测pEGFP-N1-apoJ质粒转染组、空pEGFP-N1质粒转染组、空白对照组ApoJ的表达情况.结果 不同的质粒量中1.6 μg pEGFP-N1-apoJ质粒与3.0μL脂质体制备的复合物瞬时转染效率高,分别作用24、48、72 h可达27.8％、34.3％、28.2％.蛋白免疫印迹法检测到pEGFP-N1-apoJ质粒组大量ApoJ表达,空质粒及空白对照组见微量ApoJ表达;并且pEGFP-N1-apoJ质粒组Apo-J的表达明显高于空载体及空白对照组(P＜0.05).结论 利用脂质体介导可将重组质粒pEGFP-N1-apoJ成功转染入大鼠骨髓间充质干细胞,ApoJ在大鼠骨髓间充质干细胞中得到大量表达.
