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高糖对 RSC96雪旺细胞的损伤机制
目的：观察高浓度葡萄糖对雪旺细胞增殖及凋亡的影响并初步探讨其可能机制。方法将体外培养的RSC96雪旺细胞分为正常对照组（25 mmol/L）和高糖组（100 mmol/L），分别应用MTT及流式细胞技术观察高糖对RSC96细胞增殖及细胞凋亡的影响。应用Western blotting观察高糖对Lipin-1、神经生长因子（ NGF）蛋白表达的影响，并应用免疫荧光技术进一步验证在高糖刺激下Lipin-1蛋白表达变化。结果与正常对照组比较，高糖组对RSC96细胞增殖具有显著抑制作用（P＜0．05）。与正常对照组晚期凋亡率（1．56±0．72）％相比，高糖组细胞晚期凋亡率（12．40±0．65）％明显增加。高糖显著降低Lipin-1和NGF蛋白表达（P＜0．05）。结论高糖显著抑制雪旺细胞增殖并促进细胞凋亡；同时显著降低了Lipin-1和NGF的蛋白表达。提示高糖对神经细胞的损伤作用可能存在多种机制。
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不同状态巨噬细胞对RSC96细胞NGF及Laminin表达的影响
目的 研究不同活化状态的巨噬细胞与雪旺细胞株(RSC96)共培养条件下雪旺细胞神经营养因子(NGF)及层粘连蛋白(Laminin,LN)的表达情况.方法 利用Transwell建立大鼠腹膜腔巨噬细胞和RSC96细胞的共培养体系,分别将RSC96细胞与未激活巨噬细胞、激活态巨噬细胞共培养；采用Real-time PCR检测、Western blot分析、以及酶联ELISA测定等研究手段,比较各组NGF及LN的表达差异. 结果 与未激活巨噬细胞共培养组RSC96细胞NGF表达增强,激活态组表达明显增强；而各组LN表达差异不明显. 结论 巨噬细胞对RSC96细胞NGF表达有促进作用,受其活化状态的影响,激活状态的巨噬细胞的促进作用更明显；对影响RSC96细胞迁移功能的LN的表达作用不明显,无统计学意义,有待进一步研究.
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大鼠骨髓间充质干细胞促进RSC96细胞凋亡并抑制其增殖和迁移
目的 探讨大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)对大鼠RSC96施万细胞增殖及迁移的影响.方法 全骨髓细胞贴壁法分离并提取SD大鼠BMSC,倒置显微镜观察第3代BMSC形态;流式细胞术检测细胞表面CD19、CD34、CD73、CD105;第3代BMSC经成脂成骨诱导液分别诱导3周和2周后,分别应用油红O染色和碱性磷酸酶检测BMSC的多向分化能力.应用24mm共培养板,将第3代BMSC与RSC96细胞共培养24h,采用MTT法和平板克隆形成实验检测RSC96细胞增殖及克隆形成能力;划痕实验及TranswellTM小室实验检测RSC96细胞的迁移能力;Western blot法检测RSC96细胞Bax和Bcl-2蛋白表达水平.结果 SD大鼠第3代BMSC显微镜下呈梭形、旋涡状排列,形态大小相似;BMSC表面标志CD73、CD105高表达,造血干细胞表面标志CD34和淋巴细胞表面标志CD19低表达;BMSC经成脂诱导培养3周后,细胞有大量脂滴;经成骨诱导培养2周后,碱性磷酸酶染色呈阳性;BMSC与RSC96细胞共培养后,与对照组相比,RSC96细胞的增殖活性显著降低,克隆形成能力显著减弱、细胞迁移能力降低;共培养后RSC96细胞Bax蛋白水平升高,Bcl-2蛋白表达降低.结论 BMSC能促进RSC96细胞凋亡,抑制其增殖、迁移.
