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肝癌细胞中 SPARC 表达及其与糖酵解作用的相关性
目的：探究肝细胞癌中分泌性富含半胱氨酸的酸性蛋白（ secreted protien acidic and rich in cysteine ， SPARC）表达及其与糖酵解作用的相关调节机制。方法选取肝癌细胞HepG2、Hep3B、Huh7，分别稳定转染SPARC质粒和SPARC siRNA，应用比色法检测2种转染的细胞中糖酵解关键酶己糖激酶（ HK）和乳酸脱氢酶-A（ LDHA）的活性变化。结果转染SPARC质粒的3种肝癌细胞中HK-Ⅱ、LDHA的活性较对照组明显下降，3种细胞中HK-Ⅱ相对吸光度分别降低至（57．45±5．05）％，（56．1±5．70）％，（49．73±7．06）％；LDHA相对吸光度分别降低至（50．53±8．07）％，（54．38±2．08）％，（42．34±3．44）％；差异均有统计学意义（P＜0．05）；反之，siRNA抑制SPARC表达的肝癌细胞中， HK-Ⅱ、LDHA活性较对照组明显上调，3种细胞中 HK-Ⅱ相对吸光度分别上调至（174．20±8．41）％，（166．69±9．71）％，（152．84±3．39）％；LDHA 的相对吸光度分别上调至（176．65±6．85）％；（163．24±6．44）％；（151．25±6．75）％，差异具有统计学意义（P＜0．05）。结论肝细胞癌中，SPARC通过负性调控糖酵解作用的关键酶抑制糖酵解。
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不良心理应激通过上调乳酸脱氧酶A水平促进胶质瘤增殖和侵袭
目的 探讨乳酸脱氢酶A(LDHA)表达在不良心理应激促进脑胶质瘤细胞增殖及侵袭中的作用.方法 将胶质瘤荷瘤裸鼠分为荷瘤组、荷瘤应激组、阴性对照组、短发夹RNA (shRNA)-乳酸脱氧酶A(LDHA)组、shRNA-LDHA应激组.束缚应激4周后,测量各组裸鼠肿瘤大小;利用ELISA检测血清中去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(EPI)的含量;通过比色法检测瘤组织中乳酸的量;Western blot法检测各组瘤组织LDHA蛋白表达.采用CCK-8法和平板克隆形成实验检测NE对胶质瘤LN229细胞增殖的影响;TranswellTM法检测其侵袭能力;实时定量PCR检测LN229细胞LDHA mRNA表达水平;Western blot法检测LDHA、胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、缺氧诱导因子1oα(HIF-1α)蛋白表达;利用荧光素酶报告基因活性检测实验研究NE调节LDHA表达的分子机制.结果 与荷瘤组比较,荷瘤应激组肿瘤的大小、EPI、NE、乳酸的含量及LDHA蛋白表达水平均明显增加;而沉默LDHA后,肿瘤的增殖速度、乳酸的含量显著降低;与对照组比较,NE促进LN229细胞LDHA mRNA水平,上调LDHA蛋白表达、ERK1/2和HIF-1α蛋白磷酸化水平,且细胞增殖速度、侵袭能力均增强;荧光素酶报告基因实验证实NE通过HIF-1α上调LDHA的表达.结论 不良心理应激通过上调LDHA表达促进胶质瘤增殖和侵袭.
