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HIF-1α基因介导的牙髓干细胞在体外的成血管作用
目的 探索低氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因诱导牙髓干细胞(DPSCs)在体外的成血管作用.方法 对HIF-1 α进行基因突变,构建突变型、野生型以及对照组的慢病毒载体;体外培养DPSCs;分别用3种慢病毒转染DPSCs后,检测细胞转染效率、目的基因HIF-1d在mRNA及蛋白水平的表达,MTr法检测慢病毒载体对细胞增殖的影响;目的基因转染成功后,qPCR、Western blot法检测HIF-1 α调控DPSCs成血管因子的表达.结果 MTT结果表明慢病毒载体对DP-SCs的增殖几乎无影响.qPCR和Western blot法检测目的基因HIF-1α成功表达,HIF-1α能够显著上调DPSCs的成血管因子的表达(P＜0.05).突变组和野生组的成血管作用明显强于对照组(P＜0.05),而突变组又优于野生组(P＜0.05).结论 HIF-1 α基因可以促进DPSCs血管向分化作用.
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BMP-7诱导成牙本质细胞相关蛋白在 DPSCs 中的研究
目的：检测成牙本质细胞相关功能性蛋白（DSPP、DMP-1、ALP）在 BMP-7诱导前后的牙髓干细胞（dental pulp stem cells，DPSCs）中的表达。方法：采用电镜观察、CCK8和细胞免疫化学染色的方法，观察经100 ng／ml BMP-7诱导后的 DPSCs细胞形态、增殖和向成牙本质细胞方向分化的情况。结果：经 BMP-7诱导的 DPSCs 形态无明显变化；BMP-7诱导后第7天细胞增殖比对照组减慢。DPSCs 不表达或低表达 DSPP、DMP-1和 ALP 经 BMP-7诱导后，DSPP、DMP-1和 ALP 呈阳性表达。结论：DPSCs 经 BMP-7诱导后可以向成牙本质细胞方向分化。
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人炎症及正常牙髓干细胞生物学特性的比较研究
目的：比较人炎症及正常牙髓干细胞的（iDPSCs和DPSCs）的生物学特性。方法：体外培养纯化、扩增iDPSCs和DPSCs分别检测其细胞表面特异标记物的表达、细胞增殖率、克隆形成率；然后分别对两种干细胞进行成骨、成脂诱导，并用RT－PCR检测其成骨／成牙、成脂分化相关基因的表达。结果：炎症和正常来源的DPSCs均阳性表达CD146、CD105、CD90和CD29，不表达CD45及CD31，两种干细胞各表面标志物的表达无显著性差异（P＞0．05），细胞增殖能力和单克隆形成数／率均无显著差异（P＞0．05）。两种干细胞经矿化诱导后，茜素红染色可见iDPSCs的矿化结节小于DPSCs，两者的ALP活性亦无显著性差异（P＞0．05）；成脂诱导后油红－O染色均呈阳性反应。RT－PCR检测结果显示，经矿化诱导后均表达成骨相关基因RUNX2、OCN和成牙相关基因DSPP，但iDPSCs的RUNX2、OCN和DSPP的表达水平低于DPSCs（P＜0．05）；经成脂诱导后两种干细胞均表达成脂相关基因PPARγ，两者的表达水平无显著性差异（P＞0．05）。结论：炎症DPSCs具有良好的增殖能力及多向分化潜能。
