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多聚左旋精氨酸诱导NCI-H292细胞凋亡及其可能机制的分析
目的 观察多聚左旋精氨酸(poly-L-arginine,PLA)诱导气道上皮细胞NCI-H292凋亡以及对细胞内BCL-2/Bax、Caspase3表达的影响,从而揭示PLA参与哮喘气道损伤的机制.方法 按PLA浓度不同分为对照组、10 mg/L组、20 mg/L组、40 mg/L组、60 mg/L组,流式细胞仪检测各组PLA作用24h后NCI-H292细胞凋亡率;电镜下观察60 mg/L组PLA作用24 h后NCI-H292细胞凋亡形态学改变;Western blot法检测各组PLA作用24 h后NCI-H292细胞内Bax、BCL-2及活性Caspase 3的表达.结果 各组NCI-H292细胞凋亡率分别为(4.97±0.17)％、(7.82±0.21)％、(11.99±0.21)％、(29.52±0.55)％、(55.23±0.67)％(P＜0.05);电镜下PLA作用后NCI-H292细胞呈明显凋亡改变;Western blot检测出细胞中BCL-2/Bax表达降低(P＜0.05),活性Caspase 3表达增加(P＜0.05).结论 PLA能引起气道上皮细胞凋亡,并下调BCL-2/Bax表达,上调活性Caspase 3表达.
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多聚左旋精氨酸对NCI-H292细胞炎症介质的调节
目的 研究多聚左旋精氨酸(PLA)对NCI-H292细胞分泌白细胞介素(IL)-6、IL-8、IL-13、嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)的影响.方法 将NCI-H292细胞分为对照组(培养液)、脂多糖(LPS)组(5μg/ml)、PLA组(Max=40μg/ml)、LPS+ PLA组、LPS+ PLA+肝素组.采用ELISA法检测各组IL-6、IL-8、IL-13、Eotaxin的水平,并比较各组间的差异.结果 LPS+ PLA组IL-6、IL-8、Eotaxin的水平明显高于对照组、LPS组、PLA组(P＜0.05),而LPS组、PLA组与对照组比较,IL-6、IL-8、Eotaxin的水平差异无统计学意义(P＞0.05);各组IL-13的水平差异无统计学意义(P＞0.05);而肝素能够降低LPS+ PLA组IL-6、IL-8、Eotaxin的水平(P＜0.05).结论 PLA促进LPS诱导NCI-H292细胞IL-6、IL-8、Eotaxin 的表达,但肝素可抑制其表达;而PLA对IL-13的表达没有影响.
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多聚左旋精氨酸通过p38/MAPK信号通路诱导NCI-H292细胞分泌IL-6、IL-8细胞
目的 研究多聚左旋精氨酸(PLA)诱导气道上皮细胞NCI-H292分泌炎症因子白介素-6(IL-6)和白介素-8(IL-8)的机制.方法 将NCI-H292细胞按PLA浓度分组(0、2.5、5、10、20 mg/L),采用荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测细胞中IL-6和IL-8 mRNA表达水平;按PLA加药时间分组(0、15、30、45、60 min),Western blot法检测p38/MAPK磷酸化水平;按对照组、PLA组、PLA+SB203580组和SB203580组分组,采用qRT-PCR法和ELISA法检测IL-6和IL-8的mRNA和蛋白表达量.结果 PLA能诱导NCI-H292细胞IL-6、IL-8 mRNA表达上调(P＜0.01),PLA也能增加NCI-H292细胞p38/MAPK磷酸化水平(P＜0.01),p38/MAPK阻断剂SB203580可抑制PLA诱导的NCI-H292细胞IL-6、IL-8 mRNA表达上调(P＜0.01)及p38/MAPK磷酸化水平的增加(P＜0.01).结论 p38/MAPK信号通路参与PLA诱导NCI-H292细胞炎症因子IL-6和IL-8 mRNA转录过程.
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LPS协同PLA经JNK信号通路诱导NCI-H292细胞分泌IL-6、IL-8
目的:研究多聚左旋精氨酸(PLA)和脂多糖(LPS)协同诱导气道上皮细胞NCI-H292分泌白介素-6(IL-6)和白介素-8(IL-8)的信号通路机制.方法:将NCI-H292细胞分为空白组、PLA组、LPS组、PLA+LPS组,采用Western Blot检测各组JNK的磷酸化水平,并比较SP-600125作用与否对JNK磷酸化和IL-6、IL-8表达量的影响.结果:PLA、LPS诱导NCI-H292 JNK 磷酸化水平增加(P＜0.05),两者有协同作用(P＜0.01);LPS协同PLA 诱导NCI-H292分泌IL-6、IL-8 (P＜ 0.05);SP-600125抑制PLA、LPS、PLA+LPS诱导的JNK磷酸化(P＜0.05)和IL-6、IL-8分泌(P＜0.05).结论:JNK信号通路参与LPS协同PLA诱导NCI-H292分泌IL-6和IL-8的过程.
