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3型酸敏感离子通道在髓核致炎大鼠背根神经节中的表达研究
目的 通过观察3型酸敏感离子通道(ASIC3)信号通路阻断剂阿米洛利对髓核致炎大鼠背根神经节(DRG)中ASIC3表达的影响,探索ASIC3在髓核组织诱导发生根性疼痛过程中的可能机制.方法 48只大鼠采用随机数字表法分为对照组、模型组和阿米洛利组3组,每组16只.对照组在暴露L5 DRG后直接缝合.模型组取出大鼠尾部的髓核组织置于暴露的L5DRG上,缝合切口.阿米洛利组在模型组的基础上,于术后2周内每天腹腔内注射20μg/kg阿米洛利.对照组和模型组不进行药物干预.造模成功后分别于术后2、4、6、8、10、12d检测大鼠后足的机械刺激缩足阈值(PWT).采用RT-PCR法和Western blot法测定ASIC3、TNF-o和IL-6 mRNA和蛋白表达水平.术后1、3、7和14d采用ELISA法检测外周血及DRG上清液中的TNF-α和IL-6水平,并检测一氧化氮(NO)水平.结果 与对照组比较,术后12d时模型组大鼠后足的PWT显著下降(P＜0.01),术后14d模型组大鼠DRG中ASIC3的mRNA和蛋白水平上调(均P＜0.01),外周血和DRG中NO、TNF-o、IL-6水平均上调(均P＜0.01).与模型组比较,阿米洛利组大鼠后足的PWT在8d内下降,之后逐渐增加,术后10和12d大鼠后足的PWT明显高于模型组(均P＜0.01),术后14dDRG中ASIC3的mRNA和蛋白水平下降(均P＜0.05),外周血和DRG中NO、TNF-o、IL-6水平均显著降低(均P＜0.01).结论 ASIC3可能在由髓核突出引起的神经根性疼痛中起重要作用.ASIC3可能通过上调NO及细胞炎性因子(TNF-α和IL-6)的表达并增强这些介质的疼痛加强作用,诱导痛觉过敏从而引起神经根性疼痛.
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强筋壮骨祛风合剂对髓核致炎大鼠背根神经节中3型酸敏感离子通道的影响
目的：观察强筋壮骨祛风合剂对髓核致炎大鼠背根神经节中3型酸敏感离子通道（acid －sensing ion channel 3，ASIC3）的影响。方法：选取40只清洁级成年雄性 SD 大鼠，随机分为空白组、假手术组、模型组、阿米洛利组和中药组，每组8只。除空白组外，其余各组大鼠均手术暴露 L5背根神经节。假手术组暴露 L5背根神经节后直接缝合切口；模型组和中药组取出大鼠尾部的髓核组织置于暴露的 L5背根神经节上，缝合切口；阿米洛利组将取自大鼠尾部的髓核组织置于暴露的 L5背根神经节上，并在暴露的 L5背根神经节周围滴入含0．1 mg 盐酸的阿米洛利药液1 mL，缝合切口。自造模后第1天开始，中药组按5 mL·kg －1以强筋壮骨祛风合剂灌胃，每天2次，连续30 d；空白组、假手术组、模型组不进行药物干预。分别于造模前1 d 及造模后3、5、9、15、23、29 d，采用 Up －Down 法测定大鼠左后足50％机械刺激缩足阈值（50％ paw withdrawal threshold，50％PWT）。中药组药物干预结束后，处死所有大鼠，取出 L5背根神经节分成2份，一份采用免疫组织化学法计算 ASIC3阳性面积，另一份采用 Western Blot 技术检测 ASIC3蛋白表达量。结果：造模后3 d 内，模型组、阿米洛利组和中药组均有部分大鼠出现左后足外翻以及足趾背伸现象。造模前后不同时间50％PWT 的差异有统计学意义，即存在时间效应（F ＝50．132，P ＝0．000）。5组50％PWT 总体上比较，组间差异有统计学意义，即存在分组效应（F ＝288．219，P ＝0．000）。除造模前1 d 时外（F ＝0．332，P ＝0．854），造模后各时点5组大鼠50％PWT 比较，组间差异均有统计学意义（F ＝288．015，P ＝0．000；F ＝308．588，P ＝0．000；F ＝374．945，P ＝0．000；F ＝560．713， P ＝0．000；F ＝343．043，P ＝0．000；F ＝459．914，P ＝0．000）；造模后各时点模型组的50％PWT 均低于空白组、假手术组、阿米洛利组和中药组（P ＝0．010，P ＝0．011，P ＝0．001，P ＝0．001；P ＝0．023，P ＝0．022，P ＝0．000，P ＝0．004；P ＝0．013，P ＝0．013，P ＝0．003，P ＝0．001；P ＝0．012，P ＝0．002，P ＝0．002，P ＝0．002；P ＝0．004，P ＝0．000，P ＝0．000，P ＝0．000；P ＝0．003，P ＝0．005，P ＝0．003，P ＝0．013）；造模后各时点空白组和假手术组50％PWT 比较，差异均无统计学意义（P ＝0．640，P ＝0．710，P ＝0．590，P ＝0．480，P ＝0．330，P ＝0．390）；造模后各时点阿米洛利组50％PWT 均高于中药组（P ＝0．021，P ＝0．011，P ＝0．013，P ＝0．002，P ＝0．001，P ＝0．005）。时间因素与分组因素存在交互效应（F ＝2．358，P ＝0．002）。5组大鼠背根神经节中 ASIC3阳性面积和 ASIC3蛋白表达量比较，组间差异均有统计学意义（F ＝205．890，P ＝0．030；F ＝101．740，P ＝0．001）；空白组、假手术组、阿米洛利组和中药组背根神经节中 ASIC3阳性面积和 ASIC3蛋白表达量均小于模型组（P ＝0．004，P ＝0．003，P ＝0．001，P ＝0．007；P ＝0．000，P ＝0．000，P ＝0．000，P ＝0．000）；阿米洛利组背根神经节中 ASIC3阳性面积和 ASIC3蛋白表达量均大于中药组（P ＝0．001；P ＝0．000）。结论：强筋壮骨祛风合剂可以降低髓核致炎大鼠病变的背根神经节中 ASIC3的水平，提高大鼠的疼痛阈值，但其作用效果不及盐酸阿米洛利。
