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人精子蛋白17增强型绿色荧光蛋白共表达卵巢癌细胞模型的建立
目的:建立人精子蛋白17(hSp17)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)共表达的卵巢癌细胞模型. 方法:用PCR方法获取hSp17基因片段,Hind Ⅲ/Kpn I双酶切、T4 DNA连接酶连接的方法将hSp17基因片段克隆至含报告基因EGFP的真核表达载体pEGFP-N1中,脂质体介导转染卵巢癌细胞HO8910,荧光倒置显微镜观察及Westernblot检测转染细胞中hSp17/EGFP融合蛋白的表达,G418筛选稳定表达的细胞株. 结果:酶切和测序结果均证实pEGFP-N1/hSp17重组质粒的构建完全正确.荧光观察与Western blot均证实了hSp17/EGFP蛋白的共表达,且成功筛选出稳定表达的细胞株. 结论:成功构建hSp17/EGFP共表达的卵巢癌细胞模型,为研究hSp17异常表达对肿瘤细胞生物学行为的影响,以及hSp17为靶标的肿瘤诊断和生物治疗奠定基础.
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hSp17真核表达载体构建及其在卵巢癌细胞中的表达
目的 构建人精子蛋白17(hSp17)基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)/hSp17,为其临床应用奠定基础.方法 用PCR方法获取hSp17基因片段,Nhe Ⅰ、Kpn Ⅰ双酶切、粘端连接的方法构建含有hSp17基因的peDNA3.1(+)/hSp17真核表达载体.将该载体行脂质体介导转染卵巢癌细胞HO8910,免疫细胞化学方法检测转染细胞hSp17蛋白表达,G418筛选稳定表达hSp17蛋白的细胞株.结果 酶切和测序结果均证实pcDNA3.1(+)/hSp17重组质粒的构建完全正确.免疫细胞化学方法证实外源性hSp17基因能够在卵巢癌HO8910细胞瞬时表达.经G418连续筛选,得到阳性克隆细胞株,并证实了外源性hSp17基因在卵巢癌HO8910细胞中稳定表达.结论 成功构建了稳定表达外源性hSp17蛋白的卵巢癌细胞株；其可为卵巢癌的免疫治疗奠定基础.
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人精子蛋白17在乳腺癌中的研究现状
目的 总结人精子蛋白17 (sperm protein 17,SP17)在乳腺癌中的研究现状.方法 在PubMed、Web of Science、CNKI、万方等数据库中检索SP17在乳腺癌中的表达情况及其功能的研究,并对其结果进行综述.结果 目前研究发现SP17只在乳腺癌组织中表达,而在正常乳腺组织中不表达.有研究检测到SP17只在转移阶段的肿瘤细胞中被检测到;同时体外研究发现,SP17阳性表达的乳腺癌细胞可以被特异性T淋巴细胞杀死.结论 SP17具有成为乳腺癌免疫治疗新靶点的潜能,可能具有促进癌细胞迁移的作用,未来仍需更多研究证实其在乳腺癌发生及发展过程中的作用,进而加速SP17疫苗的研制及其在乳腺癌临床治疗中的应用.
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人精子蛋白17基因在大肠杆菌中的表达
目的: 克隆人精子蛋白17(hSp17)基因,构建重组表达载体并表达重组蛋白. 方法: 用RT-PCR法从人睾丸中克隆hSp17基因,构建重组表达质粒pET-28a(+)/hSp17,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测,用特异性hSp17的mAb进行Western blot鉴定,Ni-NTA His-Bind树脂纯化重组蛋白. 结果: 克隆到hSp17 cDNA(456 bp)并经过DNA测序证实,表达和纯化得到重组蛋白hSp17(表观Mr为27 500),并经过Western blot鉴定. 结论: 成功克隆和表达hSp17 基因.
