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心肌肌钙蛋白I R146W突变对CaN-NFAT3信号通路的影响
目的 探讨心肌肌钙蛋白I Arg146Trp(cTnI R146W)基因突变在钙调神经磷酸酶(CaN)-活化T细胞核因子(NFAT)3信号通路中的作用.方法 将大鼠胚胎心肌细胞分为转染含cTnI R146W突变的腺病毒(A)组、转染野生型cTnI基因的腺病毒(B)组、腺病毒空载体对照(C)组和空白对照(D)组,Western blot法分别检测胞浆CaN、胞核NFAT3蛋白表达.结果 各组心肌细胞中均有CaN蛋白表达,但组间差异无统计学意义(P＞0.05)；A组NFAT3蛋白表达显著高于B、C、D组(P＜0.05).结论 CaN-NFAT3信号通路参与cTnI R146W突变导致心肌肥大的过程.
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体外高糖环境对 H9 C2心肌细胞增殖的影响及其机制探讨
目的：观察体外高糖环境对H9 C2心肌细胞增殖的影响，并探讨其作用机制。方法将体外培养鼠胚心肌细胞H9C2随机分为四组，1组培养液中加入终浓度为5．5 mmol／L的D-葡萄糖，2组加入终浓度为27．5 mmol／L的甘露醇和5．5 mmol／L的D-葡萄糖，3组加入终浓度为33 mmol／L的D-葡萄糖，4组加入终浓度为2μmol／L的经典瞬时受体蛋白（ TRPC）阻滞剂SKF96365和终浓度为33 mmol／L的D-葡萄糖。分别在培养24、48、72 h时，采用CCK8法测定细胞增殖率，实时定量PCR法测定经典瞬时受体蛋白6（ TRPC6）、活化T细胞核因子3（ NFAT3） mR-NA；72 h时采用Western blotting法检测TRPC6及NFAT3蛋白。结果培养72 h时1、2、3、4组细胞增殖率分别为105．88％±10．01％、98．67％±8．97％、28．55％±6．32％、49．18％±7．14％，3组较1、2组降低（P均＜0．05），4组较3组增高（P＜0．05）；3组TRPC6、NFAT3 mRNA及蛋白相对表达量较1、2组增加（P均＜0．05），4组较3组下降（P均＜0．05）。结论高糖抑制心肌细胞增殖；促进心肌细胞TRPC6表达，导致TRPC通道开放，启动钙调神经素（ CaN）／活化T细胞核因子（ NFAT）通路，可能是其作用机制。
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高糖激活Ca2＋－CaN－NFAT3信号通路致H9c2细胞肥大
目的：利用细胞实验探讨不同高糖浓度培养H9c2细胞是否引起心肌细胞肥大，探讨Ca2＋－CaN－NFAT3信号通路是否参与高糖引起H9c2心肌细胞肥厚过程。方法：体外培养H9c2大鼠心肌细胞48 h，分为5 mmol／L糖对照组、25mmol／L糖培养组、50 mmol／L糖培养组、25mmol／L糖培养加L型钙通道阻滞剂苯磺酸氨氯地平[商品名络活喜（Norvasc）]组和50 mmol／L糖培养加Norvasc组5组。观察H9c2细胞形态并测量细胞表面积大小；荧光分光光度法检测心肌细胞内钙离子浓度[ Ca2＋] i；ELISA测细胞内CaN浓度；real－time PCR法及Western blot检测 CaNAβ、NFAT3和β－MHC的mRNA及蛋白表达。结果：细胞大小、单细胞平均[ Ca2＋] i 测定荧光值及细胞内CaN浓度在随糖浓度升高呈阶梯上升，50 mmol／L时达到高点。加入Norvasc后细胞大小较相同条件不加Norvasc者降低。 CaNAβ、NFAT3和β－MHC的mRNA及蛋白表达随糖浓度升高逐步升高，50 mmol／L时达高。加入Norvasc后CaNAβ、NFAT3和β－MHC的mRNA及蛋白表达均较未加Narvasc组明显降低。结论：高糖通过激活Ca2＋－CaN－NFAT3信号通路引起H9c2心肌细胞肥大。
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线粒体乙醛脱氢酶2通过下调拮抗高糖引起的乳鼠心肌细胞损伤
目的 探讨钙调神经磷酸酶(CaN)-活化的T细胞核因子(NFAT)3通路是否介导乙醛脱氢酶(ALDH)2对高糖处理的乳鼠心室肌细胞的作用.方法 无菌条件下取出生3 d内SD大鼠乳鼠心脏,心尖部剪碎并用胰蛋白酶和胶原酶2混合酶消化成单个细胞,经差速贴壁后并在培养液中加入5-Brdu进行培养,当其生长呈融合状态时对心室肌细胞进行处理.应用免疫荧光检测培养的乳鼠心肌细胞内α-SA蛋白以此鉴定原代培养心室肌细胞纯度;实验涉及如下分组:5.5 mmol/L糖对照组(M)、30 mmol/L高糖组(MH)、30 mmol/L高糖加乙醛脱氢酶2激动剂(Alda-1)组(MHA)、30 mmol/L高糖加乙醛脱氢酶2抑制剂(Daidzin)组(MHD)、30 mmol/L高糖加乙醛脱氢酶2激动剂(Alda-1)和NFAT3抑制剂(11R-VIVIT)组(MHAV);荧光探针检测细胞内钙离子浓度;ELISA测定细胞内CaN含量;Western blot检测ALDH2、CaN、NFAT3蛋白表达.结果 与M组相比,MH组ALDH2蛋白表达降低(P<0.05),CaN蛋白表达增高(P<0.05)、NFAT3蛋白表达以及细胞内CaN含量、Ca2+浓度均增高(P<0.01);与MH组相比,MHA组Ca2+浓度降低(P<0.05)、细胞内CaN含量降低(P<0.01)、CaN蛋白和NFAT3蛋白表达降低(P<0.05)、ALDH2蛋白表达增加(P<0.05),MHD组Ca2+浓度升高(P<0.01)、细胞内CaN含量升高(P<0.05);与MHA组相比,MHAV组的ALDH2蛋白表达量无明显变化(P>0.05),NFAT3蛋白表达量降低(P<0.05).结论 线粒体ALDH2对高糖诱导的乳鼠心肌细胞起保护作用,其机制可能与ALDH2对Ca2+-CaN-NFAT3信号通路的负调节作用有关.
