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MT1-MMP miRNA干扰载体的构建及沉默效果评价
目的:构建膜型基质金属蛋白酶-1(membrane-type matrix metalloproteinase-1,MT1-MMP)基因miRNA干扰载体,检测其对靶基因的沉默效率.方法:设计4种MT1-MMP基因特异性miRNA寡聚单链DNA,利用载体构建试剂盒构建MT1-MMP基因特异性干扰质粒,挑选阳性克隆,测序无误后扩增,表明载体构建成功.抽提干扰质粒,用脂质体2000转染HEK293细胞,通过实时荧光定量PCR法检测干扰载体对靶基因的干扰效果.结果:本实验成功构建了MT1-MMP miRNA干扰载体,筛选出有效的干扰载体X173-4,并检测出其对靶基因的沉默效率可达到75%.结论:本实验结果为进一步研究MT1-MMP在口腔癌侵袭转移机制中的作用提供实验基础.
关键词： 口腔黏膜鳞癌 膜型基质金属蛋白酶-1 miRNA干扰 基因 -
pEGFP-N1-Snail真核表达质粒的构建与表达
目的:构建pEGFP-N 1 Snail真核表达质粒,并进行鉴定,转染SCC25肿瘤上皮细胞,检测其表达.方法:利用RT-PCR方法从SCC9肿瘤上皮细胞中提取Snail基因片段,与pMD18-T载体连接,构建pMD18-T-Snail重组质粒,挑选阳性克隆,PCR鉴定后送测序(重组质粒双酶切后与pEGFP-N 1真核表达载体连接,构建pE(;FP-N1-Snail真核表达质粒,进行测序、酶切鉴定,表明质粒构建成功.分别抽提pEGFP-N1及pEGFP-N 1-Snail质粒,用脂质体2000转染SCC25肿瘤上皮细胞,RT-PCR检测Snail在该细胞中表达.结果:本实验成功构建了pEGFP-Nl-Snail真核表达质粒,并在SCC25肿瘤上皮细胞中表达.结论:本实验结果为进一步研究Snail作为转录抑制因子诱导上皮间质转化提供实验基础.
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8保留式功能性颈清扫术的临床评价
目的探讨8保留式功能性颈清扫术在口腔黏膜鳞癌治疗中的应用.方法对84例口腔黏膜鳞癌患者在原发灶根治的同时施行功能性颈清扫术,其中8保留式功能性颈清扫术11例,3保留式功能性颈清扫术73例,比较不同手术方式的颈部淋巴结复发率和术区皮肤感觉保存情况.结果随访10～67个月,8保留式组无颈部淋巴结复发;3保留式组颈部淋巴结复发2例,复发率4.08%,差异无统计学意义.术后3个月复查,术区皮肤感觉良好者,前组7例,后组为0(P＜0.01).结论8保留式功能性颈清扫术不会增加颈部淋巴结复发率,可减少术后并发症,有临床应用价值.
