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再生障碍性贫血和阵发性睡眠性血红蛋白尿发病机制联系
再生障碍性贫血(AA)是由于多种原因造成造血干细胞的数量和/或功能异常,从而引起红细胞、中性粒细胞、血小板减少的一个综合病症,临床上表现为贫血、感染和出血.阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)是获得性克隆性疾病,它以有GPI-AP缺陷的异常造血细胞的出现为特征,并常合并造血抑制包括AA.PNH的主要临床表现是溶血性贫血,其常见的并发症是血栓形成、全血细胞减少、MDS、急性白血病[1].AA常同时伴有PNH,PNH患者也常合并AA的特征,称之为AA/PNH综合症.当免疫抑制治疗提高了严重AA患者的生存率,两病之间的联系更加明显.在此我们对两者之间发病机制的联系作一综述.
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大鼠体内Pig-a基因突变试验的优化及ENU时-效关系和量-效关系评估
目的 对大鼠Pig-a基因突变试验方法进行优化,并初步探讨阳性诱变剂N-乙基-N-亚硝基脲(ENU)在该实验中的时-效关系和量-效关系.方法 30只雄性SD大鼠随机平均分为5组,即溶剂对照组,ENU10 mg/kg、20 mg/kg、40 mg/kg和80 mg/kg 4个剂量组,连续3d经口灌胃染毒.分别于实验第0、15、30、45、60、75、90天尾静脉取血,分离红细胞,经Anti-CD59-APC和SYTO 13核酸染料标记后采用流式细胞仪分析CD59表型突变为成熟红细胞(RBCCD59-)率、CD59表型突变为网织红细胞(RETCD59-)率以及RET占总红细胞百分率.结果 ENU各组大鼠在染毒后第15～90天的RBCCD59-率呈现随时间和剂量反应性地增高.RETCD59-率随时间延长,ENU各组表现为先增后基本稳定伴小幅波动趋势,但均保持在较高水平,在染毒后30 d出现高峰,在45 d时出现下降;同时,随着ENU剂量的增加,ENU各组RETCD59-率也随之增加.随时间延长,ENU各组大鼠RET百分率有所下降,30 d后呈现较为稳定的轻微波动,5组间RET％在各时间点处差异均无统计学意义.结论 本研究改良的大鼠Pig-a基因突变试验可进行快速检测,ENU短期(3 d)染毒诱导大鼠红细胞Pig-a基因突变具有时-效关系和量-效关系.
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体内Pig-a基因突变试验高通量方法联合验证研究
目的:建立大鼠磷脂酰肌醇聚糖A类(Pig-a)基因突变试验高通量方法,验证该方法的重复性,并探索将此方法与流式体内微核整合至同一个试验中的可能性.方法:将20只雄性SD大鼠按照体质量随机分为4组:溶剂对照组(PBS,pH=6.0)、N-乙基-N-亚硝基脲(N-ethyl-N-nitrosourea,ENU)低剂量组(10 mg/kg)、ENU中剂量组(20 mg/kg)和ENU高剂量组(40 mg/kg),给药容量均为10mL/kg,经口灌胃给药,每天1次,连续给药3d.分别于给药前1天、首次给药后第14和30天颈静脉取血,进行Pig-a基因突变分析;首次给药后第4天颈静脉取血,采用流式细胞仪进行微核检测.结果:在首次给药后第14和30天,3种剂量(10、20和40mg/kg)下的ENU均导致大鼠外周血RBCCD59-和RETCD59-频率显著增加(P＜0.05),Pig-a基因突变结果与之前的基础型试验得到的结果类似,分析速率和分析细胞的数目得到显著提升;3个剂量的ENU均导致明显的微核率升高,与对照组比较,差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论:本研究成功建立了大鼠体内Pig-a基因突变高通量试验方法,该试验具有较好的重复性,并提示该试验可以和微核试验结合到同一个试验中.
关键词： N-乙基-N-亚硝基脲 PIG-A基因突变 免疫磁珠筛选 微核 流式细胞术
