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原代培养神经元的转染技术研究进展
体外培养原代神经元是目前研究阿尔茨海默症、脑卒中等多种神经系统疾病的一种重要手段,并已成为研究神经元各个结构发育等诸多方面的标准模型.在原代培养神经元的基础上,利用转染的方法使外源分子如DNA、RNA等在哺乳动物中枢神经系统稳定表达,是目前研究中应用广泛的方法.本文综述了如磷酸钙法、脂质体法、电穿孔法等多种转染原代神经元方法的原理、优缺点及应用.总结了近年来原代培养神经元转染技术的选择和应用进展,可为中枢神经系统的相关研究提供良好的细胞模型.
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新生小鼠海马神经元培养及形态学观察的优化方法
目的：探讨一种更加优化的体外培养海马神经元及进行形态学观察的方法，为阿尔茨海默病（A D ）神经突触的研究奠定基础。方法选择新出生后0～1 d的C57BL/6J小鼠，断头取双侧海马，采用低浓度胰酶消化加机械分离的方法，使用无血清培养基进行神经元原代培养，培养17 d后利用磷酸钙共沉淀法进行绿色荧光蛋白（GFP ）的转染，于荧光显微镜下观察海马神经元和树突棘形态特征。结果采用此方法进行的海马神经元原代细胞培养，神经元生长良好，转染GFP后可以看到清晰的轴突/树突和树突棘突等典型的神经细胞结构特征。结论此技术方法所培养的海马神经元生长良好，磷酸钙共沉淀法转染GFP后能够更加清晰地观察到神经元及树突棘的形态特征。
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人脑源性神经营养因子重组腺伴随病毒的制备
目的构建并产生人脑源性神经营养因子(human brain-derived neurotrophic factor, hBDNF)重组腺伴随病毒(adeno-associated virus, AAV)载体.方法将目的基因hBDNF插入载体质粒pSSHG-Neo的EcoRI-BamHI位点,构建重组质粒pSSHG-Neo/hBDNF.用腺病毒辅助质粒pFG140代替野生型腺病毒,包装质粒pAAV/Ad及已构建的重组质粒,三质粒磷酸钙共沉淀法转染80%融合的143细胞系,包装AAV-hBDNF.经蔗糖梯度离心法纯化、斑点杂交方法测定重组病毒滴度.结果重组病毒AAV-hBDNF滴度约为4.86×1014颗粒*L-1.结论成功制备了重组病毒AAV-hBDNF,为神经退行性疾病基因治疗实验奠定了基础.
关键词： 人脑源性神经营养因子 腺伴随病毒 磷酸钙共沉淀法 斑点杂交
