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原代培养神经元的转染技术研究进展
体外培养原代神经元是目前研究阿尔茨海默症、脑卒中等多种神经系统疾病的一种重要手段,并已成为研究神经元各个结构发育等诸多方面的标准模型.在原代培养神经元的基础上,利用转染的方法使外源分子如DNA、RNA等在哺乳动物中枢神经系统稳定表达,是目前研究中应用广泛的方法.本文综述了如磷酸钙法、脂质体法、电穿孔法等多种转染原代神经元方法的原理、优缺点及应用.总结了近年来原代培养神经元转染技术的选择和应用进展,可为中枢神经系统的相关研究提供良好的细胞模型.
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胶质瘤U251细胞外源基因瞬时转染方法的选择
目的 选择一种将外源基因瞬时转入胶质瘤细胞的高效转染方法.方法 以去内毒素真核表达载体DsRed2为外源基因,分别采用脂质体Lipofectamine2000转染法、脂质体Viafect转染法以及电转染法,将不同浓度的DsRed2质粒(0.25、0.5、1.0 μg)转染入胶质瘤U251细胞(以下称胶质瘤细胞,细胞数量均为1.0×105个).荧光显微镜下采用可见光、红色荧光滤镜观察细胞形态及红色荧光蛋白表达,紫外光滤镜下观察细胞核Hocest33342染色情况,计算转染效率.结果 三种方法均能将质粒转染至胶质瘤细胞中,红色荧光蛋白表达效果均良好.转染后的细胞形态基本正常,但表达红色荧光蛋白与未表达红色荧光蛋白的细胞形态差异较大.相同质粒浓度下,电转染法转染后表达红色荧光蛋白的细胞数量多于脂质体Lipofectamine2000转染法、脂质体Viafect转染法.随着质粒浓度的升高,脂质体Viafect转染法和电转染法对胶质瘤细胞的转染效率逐渐升高.相同质粒浓度下,电转染法对胶质瘤细胞的转染效率均高于脂质体Lipofectamine2000转染法和脂质体Viafect转染法(P均<0.01).结论 电转染法对外源基因瞬时转染胶质瘤细胞的转染效率较高,并呈质粒浓度依赖性.
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不同转染方法对逆转录病毒转染效率影响的研究
目的 探讨不同加样方法对逆转录病毒转染软骨细胞效率的影响.方法 将构建并包装好的逆转录病毒重组基因PLNCX2-IL-1Ra-GFP分别采用以下加样转染方法进行转染并作对照研究,a)第1组:先加病毒上清,6 h后补充培养液;b)第2组:先加病毒上清,隔夜补充培养液;c)第3组:先加病毒上清,6 h后更换成培养液,隔夜培养后弃液,重复先加病毒上清,6 h后更换成培养液;d)第4组:先加病毒上清,6 h后补充培养液,隔夜培养后弃液,重复先加病毒上清,6 h后补充培养液;e)第5组:经典转染法,同时加病毒上清液和培养液.转染2 d后免疫荧光显微镜下观察荧光显色,4周稳定转染后分别检测各组细胞培养液中NO含量,并用ELISA法检测上清液中hIL-1Ra的表达情况.结果 酶切鉴定重组基因正确;免疫荧光显微镜观察可见绿色荧光显色;1～5组NO含量以第4组为高,第5组为低;ELISA检测1～5组培养液中hIL-1Ra的含量以第4组为高,第5组为低.结论 四种不同加样转染方法的转染效率均高于经典法,其中以第4组为好.
