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沉默LASP1对口腔鳞癌细胞生物学行为及3种抗肿瘤药物IC50的影响
目的:评价LASP1对口腔鳞癌细胞增殖、转移、侵袭和周期的影响,并对3种抗肿瘤药物顺铂、阿帕替尼和多西他赛的相关作用进行分析.方法:利用The human protein atlas数据分析LASP1与头颈部肿瘤生存率、预后的关系.RT-PCR和Western免疫印迹检测LASP1在口腔鳞癌细胞系的mRNA和蛋白表达.慢病毒构建LASP1沉默的HN30稳转细胞株,CCK-8法检测细胞增殖,平板克隆实验检测细胞克隆形成能力,Transwell法检测细胞转移和侵袭能力,流式细胞仪检测细胞周期变化.建立裸鼠口腔鳞癌肺部转移瘤.CCK-8法分析3种药物顺铂、阿帕替尼和多西他赛在细胞中的IC50变化.采用SPSS 11.0软件包对数据进行统计学分析.结果:LASP1与头颈部肿瘤生存率、预后密切相关.LASP1促进口腔鳞癌细胞系HN30增殖、克隆形成、转移和侵袭,促进细胞周期G2/M期过渡.沉默LASP1后,裸鼠肺部转移瘤显著减少,多西他赛IC50显著下调,而顺铂和阿帕替尼IC50无显著变化.结论:LASP1促进口腔鳞癌细胞增殖、平板克隆、转移和侵袭,细胞周期G2/M期过渡,促进裸鼠体内肺转移瘤形成和多西他赛耐药.
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miR-4295靶向结合PTEN促进EMT和鼻咽癌细胞的侵袭
目的 探讨miR-4295在鼻咽癌细胞侵袭、转移过程中的作用及相关的分子机制.方法 首先通过PCR检测鼻咽癌细胞系中miR-4295的表达,通过用重组逆转录病毒介导建立稳定高表达miR-4295的鼻咽癌细胞株5-8F/miR-4295.分别应用Transwell侵袭实验、划痕损伤修复实验及三维培养实验检测过表达miR-4295后细胞株5-8F的迁移、侵袭能力;WB和QPCR方法检测E-Cadherin、Fibronectin、Vimentin在5-8F/miR-4295及5-8F/vector细胞中蛋白及miRNA的表达水平;荧光素酶活性检测miR-4295与PTEN靶向结合情况.结果 miR-4295在鼻咽癌细胞系中高表达,通过Transwell侵袭实验、划痕损伤修复实验、三维培养实验均显示过表达miR-4295后5-8F细胞的体外迁移及侵袭能力明显增强;WB及QPCR结果显示:过表达miR-4295后,5-8F细胞上皮细胞分子标志物E-Cadherin表达下调,间质细胞分子标志物Fibronectin、Vimentin表达上调;过表达miR-4295后PTEN蛋白表达抑制荧光素酶活性降低.结论 miR-4295靶向调节PTEN蛋白促进上皮细胞间质化的过程增强鼻咽癌细胞的转移及侵袭.
