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miR-149在口腔鳞癌细胞株KB中的表达及其对MMP-9的靶向调节作用
目的:探讨miR-149通过靶向调节基因对口腔鳞癌细胞生长和侵袭的影响.方法:以实验室过微阵列芯片技术筛选出的miR-149作为本实验研究对象,通过靶基因预测软件,选定基质金属蛋白酶-9(MMP-9)为其靶基因,利用实时定量PCR(RT-PCR)检测口腔鳞癌和癌旁组织中miR-149和MMP-9 mRNA的表达水平. 瞬时转染miR-149 mimics、miR-149 mimics control、MMP-9siRNA和MMP-9 siRNA阴性对照,通过PT-PCR及Western blotting 检测口腔鳞癌KB细胞系中miR-149与MMP-9的关系.运用平板克隆形成和Transwell侵袭实验检测MMP-9对口腔鳞癌KB细胞生长和侵袭的影响. 结果:在口腔鳞癌中miR-149的表达明显低于癌旁组织(P<0.01),MMP-9 mRNA的情况则相反(P<0.01). 瞬时转染后应用RT-PCR及Western blotting 检测提示,miR-149与MMP-9表达成反比,差异具有统计学意义(P<0.05),说明二者之间有靶向调节关系. 与对照组细胞相比,转染MMP-9 siRNA的口腔鳞癌KB细胞克隆数目减少(P<0.05),发生侵袭的细胞减少(P<0.05). 结论:miR-149通过靶向调节MMP-9的表达,抑制口腔鳞癌细胞的生长和侵袭,发挥着抑癌基因的作用,可望作为口腔鳞癌分子治疗的有效靶点.
关键词： 口腔鳞癌 靶向调节 microRNA-149 基质金属蛋白酶-9 -
miR-34a靶向调控NOTCH1基因对SW480细胞增殖的影响
目的 探讨miR-34a靶向调控NOTCH1基因表达而对结肠癌SW480细胞增殖的影响.方法 通过生物信息学预测,NOTCH1为miR-34a特异性靶基因.构建含miR-34a结合位点的NOTCH1基因3 '-UTR域荧光素酶报告载体.通过荧光素酶报告载体系统检测miR-34a与NOTCH1的3’-UTR相互作用对荧光素酶活性的影响；免疫印迹技术检测miR-34a对NOTCH1蛋白表达的影响.采用MTT法及流式细胞检测转染miR-34a对SW480细胞增殖的影响.结果 经过酶切及基因测序鉴定,NOTCH1基因3'-UTR序列的双荧光素酶报告重组质粒构建成功；荧光素酶结果显示在SW480细胞中加入miR-34a的类似物和重组载体,荧光素酶的活性是只加入空载体的SW480组53.4％ (P=0.003 8);而在HEK293细胞中加入miR-34a的抑制物和重组载体,荧光素酶的活性是只加入空载体的HEK293组145％(P=0.002 1),说明miR-34a有与NOTCH1的3’-UTR位点相结合.免疫印迹结果显示在SW480细胞中加入miR-34a的类似物,NOTCH1蛋白的表达水平是未处理SW480组下降53.6％(P＜0.05)；而在HEK293细胞中加入miR-34a的抑制物,NOTCH1蛋白的表达水平较未处理HEK293组升高78.9％ (P =0.03),说明miR-34a负性调控NOTCHl蛋白的表达.miR-34a过表达的SW480细胞较未处理的SW480的生长速度明显减慢(P＜0.05),且阻滞在G0～G1期,说明miR-34a过表达后能抑制SW480细胞增殖.结论 miR-34a负性靶向调控NOTCH1基因的表达而抑制SW480细胞的增殖.
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FoxM1与胶质瘤的研究进展
FoxM1是Forkhead Box（ Fox）转录因子家族的成员之一。近年来研究发现，FoxM1在脑胶质瘤的发生和发展中起着重要的作用。研究表明，人脑胶质瘤组织中FoxM1的表达明显高于正常脑组织，并且其表达水平与胶质瘤等级相关。同时，FoxM1信号途径参与调节细胞分化、增殖、凋亡、血管生成及维持干细胞自我更新等生理过程，并与多种致瘤信号途径有关。通过下调FoxM1的表达，可以抑制胶质瘤细胞的增殖、分化等生物学行为。因此，FoxM1的靶向治疗将为胶质瘤药物研发治疗提供一个潜在的新的作用靶点。
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牛膝引药下行靶向调节骨关节炎软骨退变的机制探讨
在分析、综合、归纳相关文献的基础上，以牛膝引药下行为切入点，采用文献检索方法建立牛膝的化学成分分子集，以骨关节炎为研究对象，针对骨关节炎的病理特点，探讨牛膝对骨关节炎软骨细胞、软骨基质及软骨下骨的影响，提出牛膝引药下行靶向调节骨关节炎软骨退变的可能作用模式，旨在为部分阐明牛膝引药下行的科学内涵提供理论基础。
