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牙髓细胞和肋软骨细胞共培养形成组织工程软骨的胶原类型分析
目的：研究牙髓细胞和肋软骨细胞共培养形成的组织工程软骨的胶原类型。方法：人肋软骨细胞和牙髓细胞按1∶1的比例用微团法共培养来促进其向软骨细胞分化。应用苦味酸天狼猩红染色，偏正光检测法研究形成的组织工程软骨胶原类型，并与颅颌面区域软骨进行比较。结果：肋软骨细胞和牙髓细胞微团法共培养形成的组织工程软骨中以I型胶原为主，同时包括II和III 型胶原纤维，其纤维结构组成与肋软骨、髁突软骨增殖层及颞下颌关节盘的纤维结构相似。结论：肋软骨细胞和牙髓细胞共培养可形成的组织工程软骨，其组织结构与纤维软骨相似。
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同种异体肋软骨细胞修复兔膝关节全层软骨缺损的研究
目的 观察同种异体肋软骨细胞复合透明质酸钠对兔膝关节全层软骨缺损的修复作用.方法 分离、培养肋软骨细胞,鉴定生物学活性.将36只新西兰大白兔制备膝关节全层软骨缺损模型并随机分为3组(n=12).空白组不进行特殊处理;对照组注入透明质酸钠;实验组注入肋软骨细胞/透明质酸钠复合物.术后第1、2、3个月各组分别随机处死4只兔并获取股骨远端标本,行肉眼大体观察、病理组织学检测,按O' Driseoll,keeley and salter法行组织学评分.结果 第2代肋软骨细胞阿尔辛蓝、番红O、Ⅱ型胶原染色均呈强阳性.实验组术后第1、2、3个月组织学评分(8.75000±0.50000、14.000 00±0.816 50、19.00000±0.81650)明显高于对照组(0.75000±0.50000、2.00000±0.81650、5.00000±0.816 50)和空白组(0.50000±0.577 35、0、0),同一时间点实验组与对照组和空白组组织学评分比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 第2代肋软骨细胞适合作为软骨组织工程的种子细胞;肋软骨细胞复合透明质酸钠修复兔膝关节全层软骨缺损近期效果满意.
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自体骨髓间充质干细胞和同种异体肋软骨细胞共培养修复五指山小型猪膝关节软骨缺损的实验研究
目的:探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)和肋软骨细胞(costal chondrocytes,CCs)共培养构建组织工程软骨及共培养细胞修复五指山小型猪膝关节软骨缺损的可行性,为临床修复关节软骨缺损提供理论依据和奠定实验基础.方法:密度梯度离心法分离五指山小型猪BMSCs,双酶消化法分离CCs.取第3代BMSCs和第2代CCs,随机分为3组:BMSCs:CCs为1:2的共培养组为A组,单纯CCs为B组,单纯BMSCs为C组.绘制细胞生长曲线图,测定软骨细胞外分泌基质糖胺多糖(glycosaminoglycan,GAG)的能力.将12只五指山小型猪随机分为共培养细胞/胶原膜实验组、胶原膜对照组和空白组.共培养细胞/胶原膜实验组髁间窝软骨缺损处植入共培养细胞/胶原膜,胶原膜对照组单纯植入胶原膜,空白组不做任何植入,于术后第8和16周分别处死6只动物,每组2只.取材行大体观察、软骨组织学评分及病理组织学检测.结果:密度梯度离心法分离的BMSCs生长良好,双酶消化法分离的CCs生物活性良好,共培养细胞生长良好.术后16周共培养细胞/胶原膜实验组修复组织呈透明软骨样,表面光滑平坦,周围软骨及软骨下骨整合良好,而胶原膜对照组和空白组为纤维性修复和无修复.共培养细胞/胶原膜实验组修复组织大体评分明显优于胶原膜对照组和空白组(均P<0.05),胶原膜对照组和空白组之间差异无统计学意义(P>0.05).结论:BMSCs,CCs和共培养细胞均适合作为软骨组织工程的种子细胞,其中共培养细胞(BMSCs∶CCs为1∶2)更具优势;共培养细胞复合胶原膜修复软骨缺损近期效果满意.
