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慢病毒介导的HO-1基因沉默对人白血病K562细胞增殖与凋亡的影响
目的:研究沉默血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)基因对人慢性粒细胞性白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)K562细胞增殖与凋亡的影响.方法:构建靶向HO-1基因的重组慢病毒Lv-siRNA-HO-1,将其感染K562细胞,荧光显微镜检测其适感染复数(multipliciy of infection,MOI).Western blotting检测Lv-siRNA-HO-1感染组、空载体Lv-Ctrl感染组及未感染组K562细胞中HO-1蛋白的表达,CCK-8法、流式细胞术分别检测各感染组K562细胞的增殖与凋亡.结果:成功构建靶向HO-1基因的干扰表达载体PSIH1-HO-1-siRNA,包装后形成重组慢病毒Lv-siRNA-HO-1,其有效感染K562细胞MOI值为6.与未感染组相比,Lv-siRNA-HO-1感染组K562细胞中HO-1蛋白的表达显著降低[(0.16±0.02) vs(0.70 ±0.02),P＜0.01],K562细胞增殖活性也明显下降[(1.36±0.12) vs (2.02±0.17),P＜0.01)],而K562细胞凋亡率则显著增加[(62.77±4.39)％vs(14.19±1.6)％,P＜0.01].结论:慢病毒介导的HO-1基因沉默能抑制人白血病K562细胞增殖和诱导其凋亡.
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硫氢化钠通过激活硫氧还蛋白系统减轻糖尿病大鼠心肌损伤
目的 观察外源性硫化氢的供体硫氢化钠(NaHS)对糖尿病大鼠心肌硫氧还蛋白(Trx)系统的影响.方法 雄性SD大鼠随机分为正常组、糖尿病组、(14、28、56) μmol/kg NaHS处理组,每组6只.采用一次性腹腔注射链脲佐菌素的方法制备1型糖尿病大鼠模型.造模成功4周后,NaHS处理组大鼠每天分别腹腔注射NaHS溶液(14、28、56) μmol/kg.处理4周后,测空腹血糖值(FBG)和左心室动力学指标;HE染色观察心肌病变情况、透射电镜观察心肌超微结构变化;利用试剂盒检测血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)和肌酸激酶MB同工酶(CK-MB),ELISA检测血清白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;利用试剂盒检测心肌组织总抗氧化能力(T-AOC)、脂质过氧化物(LPO)和丙二醛(MDA)含量;反转录PCR检测心肌组织血红素加氧酶1(HO-1) mRNA水平,Western blot法检测心肌组织Trx、Trx相互作用蛋白(TXNIP)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2(NOX2)的蛋白水平.结果 与正常组比较,糖尿病组左心室收缩和舒张功能均降低,心肌组织形态和心肌细胞超微结构损伤明显;FBG、LDH、CK、CK-MB、IL-1β、IL-6、TNF-α、LPO和MDA均明显增高,T-AOC明显下降;心肌Trx蛋白表达明显降低,HO-1 mRNA、TXNIP和NOX2蛋白表达明显增加.与糖尿病组比较,各剂量NaHS处理组中左心室收缩和舒张功能、心肌组织形态和心肌细胞超微结构均得到改善;LDH、CK、CK-MB、IL-1β、IL-6、TNF-α、LPO和MDA均下降,T-AOC增高;心肌组织HO-1 mRNA和Trx蛋白表达增强,TXNIP和NOX2蛋白表达降低.结论 NaHS处理可以减轻糖尿病大鼠心肌损伤,其机制可能与激活Trx系统,增强抗氧化能力及抑制炎症因子释放相关.
关键词： 硫化氢 糖尿病 心肌 硫氧还蛋白 血红素加氧酶1(HO-1)
