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降调ACSS2对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡和迁移的影响
背景与目的：代谢水平的改变是肿瘤细胞生长的主要特征之一，有研究证实，乙酰辅酶A合成酶2(cytosolic acetyl-CoA synthetase 2，ACSS2)在肿瘤细胞的代谢中起着至关重要的作用。本研究拟通过RNA干扰技术抑制非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)A549细胞中ACSS2的表达，探讨ACSS2对A549细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法：设计并合成针对ACSS2的特异性干扰片段ACSS2-siRNA及与ACSS2没有同源性的阴性对照，瞬时转染NSCLC A549细胞，通过实时荧光定量聚合酶链反应(real-time lfuorescent quan-titative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR)检测ACSS2 mRNA的表达情况，四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)实验检测转染组与对照组细胞的增殖情况，流式细胞仪检测细胞的凋亡率，细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果：通过转染体外合成的干扰片段ACSS2-siRNA，NSCLC A549细胞中ACSS2 mRNA呈显著低表达。ACSS2-siRNA干扰组的细胞较对照组增殖活性明显减弱，凋亡增加，迁移能力减弱。结论：降调ACSS2表达能显著抑制A549细胞增殖、迁移能力，促进凋亡尤其是早期凋亡明显增加。
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ACSS2上调参与食管鳞癌细胞缺氧诱导的放疗抵抗
目的:研究乙酰辅酶A合成酶2(ACSS2)上调对食管鳞癌细胞缺氧诱导的放疗抵抗效应形成的影响及潜在的分子作用机制.方法:免疫组化及免疫荧光技术细胞共定位检测65例食管鳞癌患者组织切片中ACSS2和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的表达和活化水平;将食管鳞癌ECA-109细胞分为对照组、ACSS2 siRNA组、缺氧组和缺氧+ACSS2 siRNA组,利用克隆形成实验检测不同处理组细胞对不同照射剂量(0、2、4、6、8 Gy)的放射敏感性;选择8 Gy照射处理后,采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡,蛋白质印迹法检测各组细胞凋亡相关蛋白cleaved-caspase 3/caspase 3、 Bcl-2的表达及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、 p-mTOR、核糖体蛋白S6激酶(p70S6)等信号通路蛋白的表达. 结果:食管鳞癌病理切片中ACSS2高表达,细胞密集区域尤为明显,与p-mTOR呈显著正相关(r=0.707, P<0.01);细胞克隆实验表明缺氧组细胞的存活分数比对照组明显下降(P<0.01),放疗敏感性降低,下调ACSS2可以逆转这一趋势;缺氧环境诱导的ACSS2升高促进了ECA-109细胞Bcl-2表达上调、抑制了cleaved-caspase 3的表达,同时细胞凋亡率下降(P<0.01);在缺氧条件下,下调ACSS2可以抑制mTOR信号通路相关蛋白mTOR、 p-mTOR、p70S6的活化.结论:缺氧条件下的ACSS2累积通过活化mTOR通路促进放疗抵抗效应.
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乙酰辅酶A合成酶2在结直肠癌中的表达及生物学功能
目的 探讨乙酰辅酶A合成酶2(ACSS2)在结直肠癌中的表达及其意义.方法 采用免疫组织化学方法检测比较组织芯片上74例结直肠癌组织与40例正常结直肠上皮组织标本中ACSS2的表达,并分析其与结直肠癌患者的临床病理特点的关系.同时应用RNA干扰技术下调肠癌细胞系中ACSS2的表达,检测ACSS2-siRNA(ACSS2-siA和ACSS2-siB,分别为实验组A和实验组B)干扰后结直肠癌细胞株Lovo和HCT116细胞的增殖、侵袭迁移和上皮间质转化(上皮间质转化标志物钙黏附蛋白E-cadherin和Snail)情况.结果74例结直肠癌组织中,ACSS2表达程度(6.284比3.625)与阳性细胞百分比(69.9%比45.1%)高于40例正常组织(均P<0.01).使用RNA干扰降低Lovo与HCT116中ACSS2的表达后,增殖实验显示,等量细胞铺板生长5 d后,实验组细胞计数均低于对应对照组(A450值分别为:Lovo对照组:1.758 ± 0.041;Lovo实验组A: 1.485 ± 10.026;Lovo实验组B: 1.371 ± 0.049.HCT116对照组:2.609 ± 0.038;HCT116实验组A:2.260 ± 0.042,HCT116实验组B:2.295 ± 0.029).侵袭实验显示,Lovo和HCT116实验组穿膜的细胞数目均低于对应细胞系的对照组(每个视野下细胞数分别为:Lovo对照组:225 ± 5; Lovo实验组A: 40 ± 5; Lovo实验组B:79 ± 3,P<0.05.HCT116对照组:198 ± 7;HCT116实验组A:96 ± 7;HCT116实验组B:77 ± 9, P < 0.05).定量PCR检测显示,在Lovo细胞系中,ACSS2 RNA干扰后,E-cadherin的mRNA水平显著上调(对照组:1.000 ± 0.211;实验组A: 3.403 ± 0.207;实验组B:2.658 ± 0.420, P < 0.05), Snail的mRNA水平显著下调(对照组:1.000 ± 0.085;实验组A:0.468 ± 0.030;实验组B:0.499 ± 0.088, P < 0.05);HCT116细胞系中结果类似,Snail的mRNA水平显著下调(对照组:1.000 ± 0.118;实验组A:0.265 ± 0.020;实验组B:0.194 ± 0.017,P < 0.05),但E-cadherin的mRNA水平上调不明显(对照组:1.000 ± 0.121,实验组A:1.349 ± 0.197,实验组B:1.528 ± 0.147, P > 0.05).结论 结直肠癌组织中的ACSS2表达显著高于正常结直肠组织.ACSS2可能与肿瘤迁移和上皮间质转化活动有关.
