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DLX4 RNAi抑制绒癌细胞黏附、侵袭能力的实验研究
背景与目的:绒毛膜癌是一种高度恶性的肿瘤,早期即可发生远处侵袭转移,但其机制目前尚不明确.DLX4是新近发现的同源异型盒转录因子,其异常表达与乳腺癌、结肠癌等多种肿瘤密切相关.本实验拟在既往发现DLX4在绒癌细胞株JEG-3中呈现高表达的基础上,通过RNA干扰(RNAinterference,RNAi)抑制JEG-3中DLX4的表达,探讨DLX4对绒癌细胞黏附、运动及侵袭能力的影响.方法:构建DLX4特异性的siRNA和阴性对照siRNA,脂质体转染绒癌JEG-3细胞,G418抗性筛选高表达阳性克隆;Western blot检测RNAi效果;分别用细胞-基质黏附实验、Transwell小室和Matrigel基质侵袭实验检测细胞黏附、运动和侵袭能力的变化.结果:DLX4 siRNA特异并有效的抑制了JEG-3细胞中DLX4的表达;转染DLX4 siRNA组(JEG-3 siDLX4)的细胞与细胞外基质的黏附率为(30.6±4.2)%,显著低于未转染组(JEG-3 nontransfection)的(57.2±4.0)%和转染了阴性对照siRNA组(JEG-3scDLX4)的(51.6±3.9)%(分别为P＜0.01和P＜0.05);体外细胞运动和侵袭实验结果显示,JEG-3 siDLX4组的穿膜细胞数分别为(31±3)和(21±4)个/高倍镜,显著低于JEG-3 nontransfection组的(68±5)和(64±4)个/高倍镜以及JEG-3 siDLX4组的(70±4)和(67±5)个/高倍镜(P＜0.01),而后两组细胞间黏附、运动和侵袭能力方面差异均无显著性(P＞0.05).结论:RNAi阻断DLX4的表达,能够抑制绒癌细胞的黏附侵袭能力,为进一步研究绒癌侵袭转移的机制提供了思路.
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同源异型盒转录因子DLX4对绒癌细胞凋亡的影响及其机制
目的:探讨同源异型盒转录因子(DLX4)对绒癌细胞凋亡的影响及其可能的机制.方法:用RNA干扰(RNAi)抑制绒癌细胞JEG-3中DLX4的表达;流式细胞仪分析DLX4 RNA干扰对JEG-3细胞凋亡的影响;western blot检测与凋亡有关的蛋白cleaved caspase-3、cleaved caspase-8以及bax的表达.结果:DLX4特异性的siRNA有效并特异的抑制了JEG-3细胞中DLX4的表达;DLX4的表达受抑制后,JEG-3细胞的凋亡增加,cleaved caspase-3、cleaved caspase-8的表达水平升高,而bax的表达水平无明显变化.结论:RNAi抑制DLX4的表达,可以促进JEG-3细胞的凋亡,其机制可能是通过转录调节caspase-3和caspase-8的水平,激活一系列与凋亡有关的蛋白,从而诱导JEG-3细胞的凋亡.
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乳腺癌中转录因子DLX4与EMT相关蛋白的表达及意义
目的 探讨转录因子DLX4与上皮细胞-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白在乳腺癌组织和乳腺细胞系中的表达及其相关性.方法 收集100例乳腺癌及对应癌旁组织标本,采用免疫组化SP法和Western blot法检测乳腺癌组织和乳腺细胞系中DLX4与EMT相关蛋白E-cadherin和vimentin的表达,并分析三者与乳腺癌临床病理特征的关系.结果 乳腺癌组织中DLX4和vimentin阳性率(68.0％和53.0％)显著高于癌旁组织(22.0％和28.0％)(P＜0.05),乳腺癌组织中E-cadherin阳性率(32.0％)显著低于癌旁组织(76.0％)(P＜0.05).Western blot法检测结果显示,在高侵袭性乳腺癌细胞系中DLX4、vimentin均呈高表达,E-cadherin呈低表达;DLX4、E-cadherin及vimentin的表达与乳腺癌TNM分期和淋巴结转移相关.Spearman相关分析结果显示,乳腺癌中DLX4与E-cadherin表达呈负相关(rs=-0.505,P=0.000),DLX4与vimentin表达呈正相关(rs =0.165,P=0.016).结论 乳腺癌中转录因子DLX4与E-cadherin表达呈负相关,与vimentin表达呈正相关,可能存在调控关系,从而促进乳腺癌的局部侵袭和远处转移.
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同源异型盒基因DLX4在妊娠期高血压疾病中的表达研究
目的:检测妊娠期高血压疾病胎盘组织中同源异型盒基因DLX4的表达,探讨其在妊娠期高血压疾病发生、发展中的意义.方法:严格设置病例组和对照组,采用半定量逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)和免疫组化SABC法检测40例胎盘组织中DLX4mRNA和蛋白的表达情况.结果:DLX4 mRNA在子痫前期胎盘组织中的表达(轻度为0.17±0.05、重度为0.09±0.03)明显低于对照组(0.49±0.07,P＜0.001).DLX4蛋白在子痫前期胎盘中表达与对照组相比也显著降低(P＜0.001).结论:随着妊娠期高血压疾病临床症状的加重,胎盘组织中DLX4的表达呈明显下降趋势,同源异型盒基因DLX4参与了妊娠期高血压疾病胎盘的发育障碍及功能缺陷.
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可诱导稳定表达DLX4细胞系的构建及其表达分析
目的:建立一种可诱导稳定表达方法,并构建DLX4细胞系.分析DLX4细胞系的表达调控.方法:将DLX4全长基因克隆入pcDNA5/FRT/TO表达载体,将其转染入宿主细胞Flp-InTMT-RExTM-293细胞系,潮霉素B筛选或者阳性克隆.采用不同剂量的DOX或者不同作用时间对pcDNA5/DLX4细胞系进行诱导表达,用Western blotting检测DLX4表达情况.结果:构建了可被Doxycline (DOX)诱导的稳定表达pcDNA5/DLX4的细胞系.0.001μg/ml的DOX即可诱导pcDNA5/DLX4细胞系的表达,0.1 μg/ml DOX即可诱导该细胞系表达达到高峰；DOX对该细胞系作用1h后即可诱导该细胞系表达,对其作用16h后该细胞系表达明显增强.结论:构建了可被DOX诱导稳定表达的DLX4细胞系,不同剂量的DOX和不同作用时间对DLX4细胞系表达有不同的影响.该细胞系的建立为深入探索DLX4的功能提供了一种新的有效方法和实验材料.
