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依纳西普抑制脂多糖所致流产的实验研究
人类和高等动物的免疫系统通过Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)识别并清除侵入机体的致病原.其中TLR4识别细菌脂多糖(LPS).本研究发现,给小鼠腹腔注射LPS可显著增高孕鼠胚胎丢失率.在一定剂量范围内,胚胎丢失率随着LPS剂量的增大而增高.而注射依纳西普(5 mg/kg体重)可显著削弱由LPS所引起的小鼠胚胎丢失率增高效应(从30.6％下降至6.0％; P＜0.01).流式细胞术检测发现,依纳西普可显著降低由LPS所引起的小鼠蜕膜F4/80+ TNF α+细胞百分率增高(从26.4％下降至4.7％;P＜0.01).相反,LPS单独处理或LPS与依纳西普先后处理组IL-10+细胞百分率均无显著改变.这些结果提示,依纳西普可通过抑制蜕膜F4/80+ TNF-α+细胞而对LPS所诱发的流产起到预防作用.
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TLR2和TLR7信号协同作用导致小鼠炎性反应增强和胚胎丢失率增高的机制研究
Toll样受体(Toll-like receptors,TLR)识别致病原并激活宿主固有免疫反应.其中TLR2可识别革兰氏阳性细菌的细胞壁成分,而TLR7可识别病毒所产生的单链RNA.本研究采用小鼠巨噬细胞株(RAW264.7)和新鲜获得的小鼠腹腔巨噬细胞体外培养体系,用TLR2配体肽聚糖(peptidoglycan,PGN)或TLR7配体R837单独或联合刺激,观察其刺激效应.此外,采用上述TLR配体诱导建立小鼠胚胎吸收模型,观察体内条件下TLR2和TLR7信息转导对妊娠结局的影响.结果 显示,两种配体同时刺激可呈现协同效应,导致巨噬细胞表达炎性细胞因子IL-1β、CCL5和TNF-α的水平显著增高.同时注射PGN和R837可使孕鼠胚胎丢失率显著增高.而预先注射中和抗体可显著降低PGN和R837所引起的胚胎丢失率增高.这些结果提示,细菌和病毒同时感染可发挥协同效应导致流产的发生,而IL-1β、CCL5和TNF-α等可能参与这一过程.
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ICAM-1参与脂多糖刺激引起蜕膜细胞应激状态的机制研究
为探讨细胞间粘附分子-1(ICAM-1)参与脂多糖(LPS)刺激引起蜕膜细胞应激状态的机制,本研究采用LPS刺激和联合阻断ICAM-1及其受体LFA-1(CD11a/CD18,α1β1整合素)的策略,观察小鼠蜕膜LFA-1+细胞和调节性T细胞相对数量的改变,并检测胚胎吸收率的相应变化.LPS刺激可使小鼠胚胎丢失率显著增高,而采用中和抗体抑制ICAM-1/LFA-1通路则可基本消除这一效应.进一步研究发现,LPS可使小鼠蜕膜LFA-1+细胞相对数量显著增多,调节性T细胞相对数量显著减少.相反,抑制ICAM-1/LFA-1可消除上述LPS所造成的影响.结果提示,LPS刺激可激活ICAM-1/LFA-1信息通路,减少蜕膜Treg细胞的相对数量,并导致小鼠母-胎间免疫耐受失衡而发生流产.
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FTY720抑制TLR4信号转导的炎症反应
FTY720是一种1-磷酸神经鞘氨醇(sphingosine 1-phosphate,SIP)受体拮抗剂.为阐明FTY720抑制炎症反应的机理,本研究采用流式细胞术检测FTY720对细菌脂多糖(LPS)刺激后小鼠脾脏细胞TLR4表达水平的影响.研究发现,注射适当剂量的FTY720可削弱LPS所引起的TLR4表达水平增强(FTY720处理组与对照组相比,TLR4+细胞构成比分别为6.7％±1.5％和38.6％±3.1％,P＜0.01),并可消除LPS刺激所引起的外周血TNF-α、IFN-γ和IL-12等Th1型细胞因子表达水平增高(FTY720组血清TNF-α、IFN-γ和IL-12浓度分别为(72±22)ng/ml、(46±21)ng/ml和(19±4)ng/ml,LPS组分别为(300+75)ng/ml、(175±35)ng/ml和(50±8)ng/ml,均为P＜0.01).相反,FTY720组血清Th2型细胞因子IL-4水平与对照组相比分别为(7±3)ng/ml和(7±2)ng/ml,无显著性差异.在体外细胞培养实验中可观察到一致的结果.这些发现提示,FTY720可能通过抑制LPS/TLR4信息转导通路,下调TNF-α、IFN-γ和IL-12等Th1型细胞因子表达而抑制炎症反应.
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脂多糖对蜕膜NK细胞表达NKG2D水平的促进作用
为探讨脂多糖(LPS)及其受体TLR4相互作用并影响蜕膜NK细胞的可能机制,在孕E6.5给BALB/c×C57BL/6孕鼠腹腔注射LPS,而E10.5采用流式细胞术检测小鼠蜕膜NKG2D+ TGF-β- NK细胞构成比,计算小鼠胚胎吸收率.此外,采用磁珠亲和细胞分选术纯化E10.5小鼠蜕膜NK细胞并培养,用LPS刺激所培养的细胞,并观察刺激后NK细胞表达NKG2D水平的变化.研究发现,在体内和体外实验中LPS刺激均可显著增高BALB/c×C57BL/6孕鼠蜕膜NK细胞NKG2D的表达水平,其中腹腔注射可显著增高胚胎吸收率.在体外细胞培养实验中,预先在培养基中加入抗TLR4抗体,则LPS刺激后细胞NKG2D表达水平无显著升高.这些结果提示,LPS与TLR4相互作用可增强小鼠蜕膜NK细胞NKG2D的表达,而NKG2D的过高表达不利于同种异基因妊娠成功.
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通过TLR9途径活化巨噬细胞导致小鼠流产的机制研究
为研究低甲基化型CpG与TLR9相互作用激活巨噬细胞并诱发小鼠妊娠失败的机制,本研究模拟特异性配体CpG活化TLR9的过程,并比较CpG对NK1.1+ CD3-细胞和CD11b+F4/80+细胞数量、TNF-α表达水平以及妊娠结局的影响.研究发现,在孕6.5d腹腔注射CpG可显著提高非肥胖型糖尿病(non-obese diabetic,NOD)小鼠胚胎吸收率.相反,相同剂量对野生型BALB/c小鼠则无此影响.胚胎吸收率的增高伴有CD11b+ F4/80+巨噬细胞相对数量增多和血清TNF-α水平增高,但是NK细胞构成比无显著改变.采用F4/80中和抗体抑制CD11b+ F4/80+巨噬细胞可显著降低血清TNF-α水平,并降低胚胎吸收率.这些证据表明,CpG通过激活TLR9,并提高蜕膜CD11b+F4/80+巨噬细胞相对数量、增强TNF-α表达,进而导致胚胎吸收率增高.
