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表皮生长因子对小鼠肾小管发育中细胞增殖的影响
目的:观察小鼠肾小管发育中细胞增殖和表皮生长因子(EGF)的表达特征,探讨 EGF 对小鼠肾小管发育中细胞增殖的影响.方法:应用 5-溴-2-脱氧尿嘧啶(BrdU)标记增殖细胞.应用免疫组织化学、免疫荧光、免疫印迹技术并结合体视学方法检测生后 1、3、5、6、7、14、21、28、40 d 小鼠肾小管 BrdU 阳性细胞和 EGF 的表达.结果:EGF 于生后6 d表达在肾小管上皮细胞,之后随着日龄的增加表达渐增;BrdU 阳性细胞于生后1 d表达,14 d达高峰,之后随着日龄增加而逐渐减少;生后14 d之后 EGF 与细胞增殖表达趋势完全相反.结论:推测 EGF 在生后小鼠肾发育中对肾小管的分化和成熟起重要作用,但并不促进细胞增殖.
关键词： 表皮生长因子 5-溴-2-脱氧尿嘧啶 肾小管 小鼠 -
BrdU 体外标记移植许旺细胞在构建人工神经中的应用
目的 探讨5-溴-2-脱氧尿嘧啶(BrdU) 在人工神经移植体中许旺细胞的体外标记情况,为观察组织工程化人工神经中许旺细胞的转归提供方法.方法 取胎兔许旺细胞培养后(2×10 6/ml)微注入法植入2cm长去细胞神经桥接体,在含BrdU的培养液(25 mg/ml)培养1周后, 抗BrdU单克隆抗体免疫组化ABC法染色,观察许旺细胞的标记和在神经桥接体中的分布.结果 在神经桥接体中有染色阳性细胞,细胞分布均匀.结论 BrdU可作为许旺细胞移植的标记物,观察其在体外神经桥接体中的迁徙、分布,为探讨组织工程化人工神经中许旺细胞的转归奠定基础.
关键词： 许旺细胞 移植 5-溴-2-脱氧尿嘧啶 -
胚胎期X线照射致大鼠皮质-纹状体区异常的研究
为探讨胚胎期X线照射致大鼠皮质-纹状体区的异常,本研究选取妊娠14 d(E14)大鼠接受X线(剂量为1.0Gy)照射.照射前2 h经尾静脉注入5-溴-2-脱氧尿嘧啶(BrdU),用以标识E14的神经细胞的发生.取不同时期(E14-E18)胚脑用于HE染色、BrdU免疫组化染色及Fluoro Jade B(FJB)染色观察.结果显示:HE染色观察到E14大鼠受X线照射后背侧端脑有大量细胞脱落人侧脑室并在2 d后被完全清除.而腹侧的皮质-纹状体区在照射后2 d形成窄洞并于4 d后修复.BrdU标识显示腹侧端脑的外侧节隆起的神经细胞移动类似于正常对照组,2 d后阳性细胞分布在皮质-纹状体区形成的空洞周围,4 d后移动到腹侧皮质板.Fluoro Jade B染色显示照射后1 d在皮质.纹状体区有大量阳性细胞,2 d后显著减少.本实验结果提示:E14大鼠受X线照射引起外侧节隆起的神经细胞在移动过程中死亡并导致皮质-纹状体区形成空洞,从而引起内囊发生异常.
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胚胎期X线照射致大鼠皮质下异位细胞团形成和胼胝体缺失的相关性研究
为探讨胚胎期大鼠受X线照射后皮质下异位细胞团形成与胼胝体缺失的相关性,本研究将妊娠14 d(E14)大鼠经X线全身照射(剂量为1.0 Gy),在照射前2 h及照射后2 d(E16)经尾静脉注入5-溴-2-脱氧尿嘧啶(BrdU),用以标识E14及E16的神经细胞的发生.取不同时期(E14～P3)胚脑用于Nissl染色及免疫组化染色分析.结果显示:(1)胚胎期经X线照射的新生大鼠可见新皮质变薄,胼胝体缺失,以及皮质板下的异位细胞团形成;(2)在x线照射前2 h注射BrdU:大鼠经照射后6 h(E14～6 h),侧脑室内可见大量Brdu阳性细胞;在E16和E18时,BrdU阳性细胞表达于皮质边缘带及下板层,但数目远少于未接受X线照射的对照组;(3)X线照射后2 d即E16时注入BrdU:大鼠在E20和P1时,BrdU阳性细胞与对照组同样分别表达于皮质板的上层及下层,但数目较对照组明显减少;同时可见大脑皮质第Ⅱ、Ⅲ层细胞大部分缺损以及由BrdU弱阳性细胞聚集在皮质板下层形成的异位细胞团.本实验结果证明:X线照射可损伤多数正处于分裂期的神经上皮细胞,且后续发生的部分神经细胞不能正常移动到他们的目的地(皮质板第Ⅱ、Ⅲ层)而聚集在皮质板下成为异位细胞团.由于胼胝体主要由大脑皮质第Ⅱ、Ⅲ层细胞的轴突构成,我们推测异位细胞团的形成可导致胼胝体的缺失.
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大鼠脊髓发育过程中神经干细胞的分布
本研究应用BrdU注射技术及免疫荧光染色技术检测正常大鼠发育中脊髓内BrdU、PCNA、nestin阳性细胞分布情况.结果显示,胚胎12.5 d(E12.5)时,BrdU阳性细胞分布于神经管全层,阳性标记率高.随胚龄增加,大鼠脊髓内BrdU阳性细胞标记率降低.PCNA阳性细胞分布和变化规律与BrdU阳性细胞一致.正常成体动物脊髓内较难检测到增殖细胞.胚胎发育早期脊髓脑室带、套层、缘层均可检测到nestin阳性细胞.随大鼠脊髓发育成熟,nestin阳性细胞数量逐渐减少.本研究结果提示,脊髓源性神经干细胞的分布有时空规律性.随大鼠脊髓发育的逐渐成熟,增殖细胞减少,干细胞标记逐渐消失,因此在E12左右分离脊髓源性神经干细胞较适宜.
关键词： 神经干细胞 脊髓 5-溴-2-脱氧尿嘧啶 大鼠
