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纳米技术在肿瘤防治中的应用
纳米技术是指在1～100nm的度量范围内,研究和利用原子、分子的结构和特征及相互作用.纳米微粒的尺寸比一般生物体的细胞小得多,这就为生物学的提供了一个新的研究途径.纳米技术在生物医学上的应用已经开始,本文主要介绍一下医用纳米控释系统和纳米磁流体在肿瘤防治方面的应用.
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煤油纳米磁流体组织内固定的实验研究
目的研究纳米磁流体在组织间自身固定的可能性.方法煤油纳米磁流体与125Ⅰ-碘化钠、微米级硬磁粉混合,实验组局部注射到5只昆明鼠左腹股沟皮下,(煤油磁流体0.1 ml+125Ⅰ-碘化钠5×37×103Bq+硬磁粉1 mg)/只,5只昆明鼠左腹股沟皮下注射(煤油磁流体0.1 ml+125Ⅰ-碘化钠5×37×10-3 Bq)/只为对照组,在4周后处死动物,取注射点有磁流体污染的全部组织,行γ计数.结果实验组局部γ计数显著高于对照组,相差几乎1个数量级,单因素方差分析F值380.862,P＜0.001.结论煤油纳米磁流体与微米级硬磁粉混合在局部有可能达到自身固定,为局部药物自身固定研究提示新的可能.
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纳米磁流体介导的重组质粒PEGFP-AFP-hTN Fα对肝癌细胞HepG2的体外杀伤作用
目的 探讨纳米磁流体作为肝癌基因治疗栽体的可行性及AFP增强子能否使外来基因在AFP阳性细胞内高表达.方法 构建重组质粒PEGFP-AFP-hTNFα并通过纳米磁流体分别转染入AFP表达阳性的肝癌细胞HepG2及AfP表达阴性的宫颈癌细胞Hela.转染12h后,于荧光显微镜下动态观察;48h后,g.T-PCR和Westemblot分析HepG2细胞中hTNFα基因的表达情况,用MTT法检测HepG2细胞的存活,用流式细胞分析HepG2细胞的凋亡.结果 纳米磁流体能将重组质粒PEGFP-AFP-hTNFα转入HepG2细胞,并且其转染效率高于脂质体;KT-PCK及Westemblot证明转染的HepG2细胞有hTNFα基因的表达;MTT及流式细胞分析说明hTNFα基因发挥杀伤细胞作用.结论 纳米磁流体能将重组质粒PEGFP-AFP-hTNFα转染HepG2细胞并获得表达,可作为肝癌基因治疗的基因栽体.采用AFP增强子可使目的基因在HepG2细胞中定向而特异性表达.
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纳米磁流体-单纯疱疹病毒胸苷激酶重组质粒的构建及其对胃癌细胞增殖的影响
目的 研究hTERT启动子调控下单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)重组质粒的构建、在人胃癌细胞BGC823中的表达及对胃癌细胞BGC823增殖的影响.方法 构建重组质粒pGL3 -hTERT-tk和相应的荧光报告质粒pGL3-hTERT-tk-Luc+；经纳米磁流体PEG-PEI/Fe3O4转染胃癌细胞BGC823,荧光显微镜观察细胞形态变化和转染效率,免疫组织化学(免疫组化)方法检测目的基因在胃癌细胞BGC823中的表达,MTT法检测胃癌细胞BGC823的增殖能力,以上实验均以正常肝细胞LO2为对照.结果 重组质粒pGL3-hTERT-tk构建成功,其长度为1100 bp.荧光素酶标记的阳性、阴性对照及治疗报告质粒pGL3-hTERT-TK- Luc+均能有效转染高表达端粒酶活性的胃癌细胞BGC823,转染效率为(28.1±2.3)％.免疫组化结果显示,重组质粒组胃癌细胞BGC823的细胞质中可见大量HSV -tk基因编码的表达.MTT检测结果示,转染pGL3-hTERT-tk质粒4d后,BGC823细胞增殖受抑制,其A570值为0.254±0.011,低于L02细胞的0.322±0.013;亦低于pGL3-basic-tk转染的BGC823细胞(0.357±0.014)(均P＜0.05).结论 纳米磁流体能将重组质粒pGL3-hTERT-tk转染BGC823细胞并获得表达,PEG-PEI/Fe3O4纳米磁流体-tk可显著抑制BGC823细胞增殖,有望成为胃癌基因治疗的新型生物制剂之一.
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PEG-PEI/Fe3O4纳米磁流体-TK对肝癌细胞HepG2凋亡的影响
目的:探讨PEG-PEI/Fe3O4纳米磁流体-TK对肝癌细胞HepG2凋亡的影响.方法:构建重组质粒PEGFP-AFP-TK并通过纳米磁流体分别转染入AFP表达阳性的肝癌细胞HepG2及AFP表达阴性的肝癌细胞SMMC7721.转染12 h后,于荧光显微镜下动态观察;48 h后,RT-PCR和Western blot分析HepG2细胞巾HSV-TK基因的表达情况,用MTT法检测HepG2细胞的存活,用流式细胞分析HepG2细胞的凋亡.结果:纳米磁流体能将重组质粒PEGFP-AFP-TK转入HepG2细胞,并且其转染效率高于脂质体;RT-PCR及Western blot证明转染的HepG2细胞有HSV-TK基因的表达;MTT及流式细胞分析说明HSV-TK基因发挥杀伤细胞作用.结论:纳米磁流体能将重组质粒PEGFP-AFP-TK转染HepG2细胞并获得表达,PEG-PEI/Fe3O4纳米磁流体-TK可显著抑制HepG2细胞增殖,可望成为肝癌基因治疗的新型生物制剂之一.
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纳米磁流体介导的重组pEGFP-AFP-TK对AFP表达阳性肝癌细胞HepG2的杀伤作用的体外实验
目的: 探讨纳米磁流体介导的重组质粒pEGFP-AFP-TK对AFP表达阳性的肝癌细胞HepG2的杀伤作用.方法:通过纳米磁流体将构建好的重组质粒pEGFP-AFP-TK 并分别转染AFP表达阳性的肝癌细胞HepG2 及AFP表达阴性肝癌细胞SMMC-7721,于荧光显微镜下动态观察;使用RT-PCR和Western blot分析HepG2 细胞中TK 基因的表达情况,MTT法检测转染重组TK表达质粒后的细胞在更昔洛韦(GCV)作用下的存活率并观察旁观者效应,用流式细胞术分析HepG2细胞的凋亡.结果:纳米磁流体能将重组质粒pEGFP-AFP-TK转入AFP阳性的HepG2 细胞,其转染效率高于脂质体;RT-PCR 及Western blot证明转染的AFP阳性的HepG2 细胞有TK基因的表达;MTT 及流式细胞术分析说明TK基因发挥杀伤细胞作用.结论:纳米磁流体能将重组质粒pEGFP-AFP-TK转染HepG2细胞并获得表达,可作为肝癌基因治疗的基因载体,采用AFP增强子可使目的基因在HepG2 细胞中特异性表达,并且在前药GCV的作用下,能使AFP表达阳性的肝癌细胞HepG2发生凋亡及旁观者效应.
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微创股动脉粥样硬化闭塞症家兔模型的建立
目的 探讨动脉粥样硬化闭塞症家兔模型的建立方法 .方法 30只大白兔分为实验组和对照组,分别注入纳米磁流体和生理盐水,16周后观察模型制作前后家兔跛行情况、下肢皮肤温度和颜色变化;测定血清胆固醇、血脂及血浆内皮素水平变化.结果 实验组家兔出现不同程度的跛行、皮肤温度降低和颜色改变,血清胆同醇、血脂、血浆内皮素水平不同程度增高;动脉内膜出现脂纹、纤维瘢块、粥样瘢块等变化.结论 股动脉穿刺注入纳米磁流体制作股动脉粥样硬化闭塞症家兔模型是一种切实可行的方法 ,具有创伤小、操作可靠等优点.
