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miR －219在舌鳞状细胞癌中的表达及意义研究
目的：探讨miR－219在舌鳞状细胞癌（Tongue squamous cell carcinoma ，TSCC）中的表达及其在TSCC发生发展中的作用。方法利用qRT－PCR检测miR－219在26例TSCC组织及对应癌旁组织标本、舌磷癌细胞SCC－15及正常口腔黏膜细胞中的表达。在舌磷癌细胞SCC－15中转染miR－219基因，用MTT法、克隆形成实验、Transwell细胞迁移及侵袭实验检测miR－219过表达对舌磷癌细胞SCC－15增殖、克隆形成、迁移及侵袭的影响。结果 qRT－PCR结果显示，miR－219在TSCC组织中的表达水平明显低于对应正常癌旁组织（P＜0．001），舌磷癌细胞SCC－15中miR－219的表达水平亦低于正常口腔黏膜细胞（ P＜0．05）。 MTT结果表明，转染miR－219后，与对照组相比，舌磷癌细胞SCC－15的增殖受到明显抑制（P＜0．05）。克隆形成实验发现，miR－219过表达明显抑制了SCC－15细胞的克隆形成能力（P＜0．05）。同时miR－219上调也明显抑制了舌磷癌细胞SCC－15迁移及侵袭能力（P＜0．05）。结论在TSCC中miR－219表达降低；miR－219上调可抑制舌磷癌细胞SCC－15的增殖、克隆、迁移及侵袭能力。
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miR-219调控PRKCI表达在舌鳞状细胞癌中作用和机制
目的 探讨PRKCI与miR-219表达的相关性以及对舌鳞状细胞癌的细胞增殖、侵袭和转移的影响.方法利用双荧光素酶报告基因实验对预测的靶基因进行验证,用qRT-PCR和Western blot实验检测外源过表达miR-219对舌鳞状细胞癌细胞中转染的PRKCI基因和蛋白表达的影响.后在过表达miR-219的稳转细胞系中再过表达PRKCI,利用MTT法、细胞平板克隆实验、划痕实验和Transwell小室法分析PRKCI对miR-219抑制舌鳞状细胞癌细胞增殖、克隆形成能力、迁移能力和侵袭能力的逆转效果.通过qRT-PCR法检测舌鳞状细胞癌组织中PRKCI基因的表达情况并进一步分析PRKCI和miR-219之间的关系.结果 通过生物信息学分析预测得到miR-219下游靶基因为PRKCI.双荧光素酶报告基因实验结果显示miR-219能够降低野生型PRKCI报告基因载体的荧光活性.此外qRT-PCR实验和Western blot实验也显示miR-219能够下调PRKCI在舌鳞状细胞癌细胞中的表达. MTT结果显示过表达PRKCI能够逆转miR-219对舌鳞状细胞癌细胞增殖活性的抑制效应,进一步通过细胞平板克隆实验、划痕实验以及Transwell实验证明PRKCI过表达能够逆转miR-219对TSCC细胞增殖、侵袭和转移的抑制效应.结论 miR-219通过直接靶向PRKCI、负调控PRKCI的表达发挥抑制肿瘤的作用.在舌鳞状细胞癌组织中,miR-219与PRKCI的表达呈负相关.
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miR-219基因及其靶基因CAMK2G多态性与精神分裂症的关联研究
目的 探讨微小核糖核苷酸-219(microRNA-219,miR-219)及其靶基因钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱγ(Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase Ⅱ gamma,CAMK2G)多态性与精神分裂症的关系. 方法 采用TaqMan探针基因分型技术在中国汉族人群中对1041例精神分裂症患者和953例正常对照者进行miR-219基因rs107822和CAMK2G基因rs2306327的分型.利用二级结构预测软件CentroidFold预测rs107822对miR-219二级结构影响.结果 miR-219基因rs107822多态的等位基因分布在患者组与正常对照组之间差异有统计学意义(x2=7.33,P=0.007)；在非条件Logistic回归分析中,rs107822基因型分布符合加性遗传模式(P=0.0072),携带C等位基因可降低精神分裂症的发生风险(OR=0.84,95％ CI=0.74～0.95)；软件预测发现rs107822 T等位基因突变成C等位基因后,miR-219基因的初级转录产物的二级结构发生了改变.CAMK2G基因多态性rs2306327的等位基因和基因型分布在病例组与对照组间的差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 在中国汉族人群中,miR-219基因rs107822多态可能与精神分裂症有关.
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未成熟大鼠脑白质损伤对miR-219变化的影响
目的:研究miR-219在未成熟大鼠脑白质损伤时的变化,探索早产儿脑白质损伤后髓鞘化障碍的发病机制.方法:缺血缺氧(HI)法建立未成熟大鼠脑白质损伤的动物模型.4日龄SD大鼠随机分为实验组(n=80)和对照组(n=60).实验组予右侧颈总动脉永久性结扎后,6％氧气、94％氮气吸入90 min.qPCR检测HI后1 d、3 d、7 d时两组胼胝体miR-219的动态表达变化,免疫印迹检测HI后3 d、7 d时PDGFRα在胼胝体中的表达,Morris水迷宫评估大鼠认知和记忆能力.结果:成功建立了未成熟大鼠脑白质损伤的动物模型,HI后7天两组大鼠胼胝体miR-219的相对表达量均较1天和3天时明显上升(P<0.01),但实验组7 d时miR-219表达量显著低于对照组(6.63±1.39 vs 13.19±2.23,P<0.01);HI后7 d时两组大鼠胼胝体PDGFRα 蛋白表达比3天时均有所降低,但实验组7 d时PDGFRα蛋白表达降低较慢,其相对灰度值显著高于对照组(0.93±0.04 vs 0.76±0.05,P<0.01);实验组大鼠HI后14天髓鞘碱性蛋白表达降低,成年期Morris水迷宫实验显示其逃避潜伏期时间长于对照组(P<0.05),第5天60 s内穿越平台次数少于对照组(P<0.05),在目标象限停留的时间百分比低于对照组(P<0.01).结论:未成熟大鼠脑白质损伤时miR-219的表达在发育过程中其上升趋势受到抑制,并伴有PDGFRα的表达相对增加,提示miR-219在早产儿脑白质损伤后髓鞘化障碍发生机制中发挥重要作用.
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侧脑室注射miR-219激动剂对脂多糖所致新生大鼠少突胶质细胞成熟障碍的影响
目的 探讨侧脑室注射miR-219激动剂对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)所致新生大鼠少突胶质细胞成熟障碍的影响.方法 将出生2d的Sprague-Dawley (SD)大鼠60只随机分为4组,每组15只.对照组:腹腔注射等体积生理盐水,24 h后侧脑室注射2μL miRNA阴性对照.脂多糖组(LPS组):腹腔注射0.25 mg/kg LPS,24 h后侧脑室注射2μL miRNA阴性对照;miR-219激动剂组(miR-219组):腹腔注射等体积的生理盐水,24 h后侧脑室注射2μL miR-219激动剂;LPS加miR-219激动剂组(LPS+ miR-219组):腹腔注射0.25 mg/kg LPS,24 h后侧脑室注射2μL miR-219激动剂.实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测脑组织中miR-219和髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP) mRNA的表达,苏木精伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察脑白质形态学改变,免疫组化观察成熟少突胶质细胞(oligodendrocyte,OL)的表达,免疫印迹法(Western blotting)检测脑组织内MBP和Sox6蛋白的表达.结果 侧脑室注射miR-219激动剂后,miR-219组miR-219的表达增高(P＜0.05);腹腔注射LPS后,LPS组脑白质区组织结构疏松,细胞核固缩,与对照组比较,成熟少突胶质细胞标志物MBP的表达显著下降,少突胶质细胞分化抑制因子Sox6表达明显增多(P＜0.05);相较于LPS组,LPS+ miR-219组MBP表达增多,Sox6表达显著降低(P＜0.05),且与对照组无明显差异(P＞0.05).结论 侧脑室注射miR-219激动剂可以改善LPS致新生鼠少突胶质细胞成熟障碍.
