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复方苦参液通过癌相关成纤维细胞途径抑制肠癌细胞迁移能力的实验研究
目的:探讨复方苦参液是否通过干预肿瘤相关成纤维细胞(cancer associated fibroblasts,CAF)而抑制肿瘤进展.方法:通过条件培养基诱导成纤维细胞CCD-18Co为CAF,Western blot检测αSMA蛋白表达.复方苦参液处理CAF细胞后,通过Transwell检测CAF对肠癌DLD-1细胞迁移的影响;并用Real-time PCR检测复方苦参液处理后CAF细胞的miR-1290的表达.结果:CM培养基诱导的CAF细胞标志蛋白αSMA表达升高;复方苦参液作用CAF细胞后可抑制肠癌DLD-1细胞的迁移能力;复方苦参液抑制CAF细胞miR-1290的表达.结论:复方苦参液通过抑制miR-1290的表达而抑制CAF细胞的促迁移能力.
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乏氧和辐射诱导的miR-1290促进宫颈癌细胞EMT发生
目的:研究miR-1290在宫颈癌Hela细胞上皮间质转化中的作用.方法:模拟肿瘤放射治疗的分割疗法,单次2Gyγ射线连续照射宫颈癌Hela、Siha细胞诱导辐射抗性细胞株;采用microRNA芯片技术比较辐射抗性细胞与亲本细胞中miRNA的表达谱差异;经不同条件乏氧和辐射处理宫颈癌Hela细胞后检测miR-1290的表达水平;借助miR-1290及miR-1290-inhibition慢病毒表达载体,调变miR-1290在Hela细胞的表达;调变miR-1290后,划痕实验及Transwell侵袭实验比较Hela细胞的侵袭和转移能力;蛋白质印迹法检测细胞中E钙黏素(E-cadherin)和N钙黏素(N-cadherin)的表达.结果:在宫颈癌辐射抗性细胞中miR-1290表达水平显著升高(P＜0.05);乏氧和辐射可诱导miR-1290在宫颈癌Hela细胞中表达(P＜0.05);上调表达miR-1290,Hela细胞出现了明显的间质细胞的形态改变,细胞的侵袭和转移能力明显增强(P＜0.05).在Hela细胞中上调表达miR-1290,降低了细胞中E-cadherin的表达,同时升高了N-cadherin的表达(P＜0.05).结论:乏氧和辐射可诱导miR-1290在宫颈癌Hela细胞中表达,miR-1290通过调控E-cadherin和N-cadherin的表达促进宫颈癌Hela细胞发生EMT.
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miR-1290对人脐带间充质干细胞增殖、周期和凋亡的调控作用研究
目的:探索microRNA-1290对人脐带间充质干细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响.方法:以从胎儿脐带分离的间充质干细胞为基础细胞,构建miR-1290模拟物,进行瞬时转染,通过荧光定量PCR检测转染后miR-1290水平;运用MTT方法观察转染miR-1290后间充质干细胞的增殖情况;通过流式细胞仪染色观察转染后细胞周期和细胞凋亡的变化.结果:荧光定量PCR结果显示,转染后miR-1290表达水平显著升高12.2倍;MTT结果表明,高表达miR-1290相比于阴性对照组(NC组)可以促进间充质干细胞的增殖;流式细胞周期检测结果发现,转染miR-1290后,细胞周期G1期从(85.90± 1.91)％缩短至(76.35±2.03)％,而S期和G2期与对照组相比均明显增加,增殖指数(22.75± 3.01)相比于对照组(14.10±1.87)也显著升高(P＜0.05);凋亡检测结果显示,高表达miR-1290细胞凋亡率(4.9± 0.276)％与阴性对照组(8.2± 0.891)％相比下降,有统计学意义(P＜0.05).结论:miR-1290可以提高MSC的增殖能力,延长S期和G2期,并一定程度上抑制MSC的凋亡.
