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前列腺酸性磷酸酶体外诱导胃癌特异性免疫应答的实验研究
目的 探讨前列腺酸性磷酸酶是否可以诱导胃癌患者的PBMCs产生特异性CTLs.方法 利用PAP213-221(LYCESVHNF)多肽与HLA-A24+对4例胃癌患者的PBMCs进行体外诱导,ELISA法检测PAP多肽特异性IFN-γ的分泌水平,51Cr 释放法测定CTLs的细胞毒活性.结果 从2例胃癌患者的PBMCs中诱导出PAP多肽特异性CTLs特异性杀伤PAP+/HLA-A24+的胃癌细胞MKN45,CTLs的细胞毒活性依赖于CD8+的T淋巴细胞.结论 PAP可能成为胃癌特异性免疫治疗的新靶点.
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TGF-β不敏感前列腺癌特异性CTLs的制备及其抗癌作用
目的:制备TGF-β不敏感前列腺癌特异性CTLs,观察其对前列腺癌的治疗作用.方法:分离前列腺癌患者外周血单个核细胞,体外诱导DCs;制备该患者前列腺癌肿瘤抗原,冲击DCs后诱导肿瘤特异性CTLs;用携带TβRⅡDNglytk基因的慢病毒感染肿瘤特异性CTLs;Western blotting检测TβRⅡDNglytk感染后CTLs对TGF-β的敏感性.分别以TGF-β敏感和不敏感CTLs治疗小鼠前列腺癌移植瘤,比较其疗效.结果:前列腺癌组织抗原冲击后DCs诱导的肿瘤特异性CTLs生长速度快于未冲击DCs组(P<0.01),其活化状态标志CD25的表达显著高于对照CTLs(P<0.01).TβRⅡDNglytk慢病毒感染使肿瘤特异性CTLs对TGF-β敏感性减弱.TGF-β不敏感的CTLs可显著抑制荷瘤鼠前列腺癌的生长(P<0.01).结论:成功制备的TGF-β不敏感前列腺癌特异性CTLs对小鼠前列腺移植瘤有明显的治疗作用,为前列腺癌免疫治疗奠定了一定的实验基础.
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抗原致敏树突状细胞诱导CTLs杀伤HL-60细胞作用研究
目的探讨树突状细胞(DC)在体外诱导针对白血病细胞的CTLs杀伤活性.方法用IL-4和GM-CSF培养正常人外周血DC,以HL-60细胞裂解液致敏DC,再与淋巴细胞共孵育,激活T淋巴细胞,用LDH释放法测定致敏DC诱导杀伤性细胞对HL-60细胞的杀伤活性.结果外周血单个核细胞经体外扩增培养出可见树突状形状的DC,流式细胞仪检测细胞表面CD1α及CD86表达阳性,CD14表达阴性.混合淋巴细胞反应(MLR)观察DC刺激的异体淋巴细胞增殖明显较对照组高,两者比较有显著性差异(n=15,P<0.01).在效靶比为20∶1时,抗原致敏的DC诱导的杀伤性T细胞对HL-60细胞的杀伤率是39.9%±21.5%,直接以抗原刺激的T细胞的杀伤率是26.3%±15.6%.两组比较差异有非常显著性(n=16,P<0.001).效靶比为2∶1时,抗原致敏的DC诱导的杀伤性T细胞对靶细胞就有明显的杀伤作用,随着效靶比增加,杀伤作用增强.实验组和对照组不同效靶比杀伤率比较,差异有非常显著性(n=16,P<0.001).结论 DC在体外经HL-60细胞裂解液抗原致敏后,可诱导产生对HL-60细胞有特异性杀伤作用的效应细胞,杀伤HL-60细胞,且随效靶比的增加,杀伤力增强.
