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β-淀粉样蛋白对大鼠大脑α7尼古丁受体表达和学习记忆能力的影响
目的 研究β-淀粉样蛋白(Aβ1～42)对大鼠大脑神经型尼古丁受体α7 亚单位表达及学习记忆能力的影响,探讨这些改变在阿尔茨海默病(AD)发病机制中的作用.方法 用立体定向法将 Aβ1～42(1 mg/ml,5 μl)注入 Wistar 大鼠侧脑室,用免疫组化方法测定大鼠大脑中Aβ1～42的沉积,用 Western 印迹法和 RT-PCR 方法分别测定神经型尼古丁受体α7 亚单位在蛋白和基因水平的表达,用水迷宫法检测大鼠的学习记忆能力.结果 与对照组比较,经 Aβ1～42侧脑室注射后的大鼠大脑皮层出现明显Aβ1～42沉积;神经型尼古丁受体α7 亚单位蛋白质表达水平明显降低;α7亚单位 mRNA 表达水平明显升高;大鼠学习记忆能力明显降低.结论 Aβ1～42引起神经型尼古丁受体α7 亚单位的表达明显改变,并导致大鼠学习记忆力降低,可能是AD发病机制中的重要因素.
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γ-分泌酶在阿尔茨海默病发病中的作用及与神经型尼古丁受体关系
阿尔茨海默病(AD)是一种常见的人类中枢神经系统的退行性病变,临床上将其定义为进行性认知功能的丧失和从中年期到晚年期缓慢发生的进行性记忆损伤[1].病理学上以细胞外老年斑(SPs)形成及神经细胞内神经元纤维缠结(NFTs)为主要特征[2],还伴有颗粒空泡变性(GD)、平野小体(HB)、神经元减少等[3].
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神经型尼古丁受体α3亚单位及丝裂原活化蛋白激酶信号通路在氟暴露神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y中的表达
目的 观察神经型尼古丁受体α3亚单位(α3nAChR)及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p38激酶在氟暴露神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y中的表达,探讨过量氟暴露对细胞形成损害的信号传递机制.方法 以α3nAChR基因沉默的SH-SY5Y细胞作为α3nAChR沉默组,以正常SH-SY5Y细胞作为对照组,采用蛋白印迹法和实时荧光定量PCR法检测α3nAChR基因沉默效果.分别用0.000、0.005、0.050、0.500、1.000、2.500、5.000 mmol/L氟化钠(NaF)处理正常SH-SY5Y细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率,筛选染氟安全浓度.根据染氟安全浓度筛选结果,选择4.000 mmol/L NaF处理α3nAChR沉默组和对照组SH-SY5Y细胞0、4、8、12、24、36、48 h,用蛋白印迹法检测细胞中ERK1/2、JNK、p38蛋白表达.结果 基因沉默效果检测结果显示,在α3nAChR沉默组,α3nAChRmRNA(0.04±0.03)和蛋白(12.0±2.5)表达明显低于对照组(1.00±0.11、100.0±11.3,t=24.58、28.80,P均＜ 0.05).筛选染氟安全浓度结果显示,在染氟5.000 mmol/L组,SH-SY5Y细胞存活率(0.53±0.15)明显低于0.000 mmol/L组(1.05±0.05,P＜0.05),而其他染氟剂量组未见明显改变(P均＞0.05).随着染氟时间延长,α3nAChR沉默组和对照组磷酸化ERK1/2表达逐渐升高,其中24、36、48 h(188.33±7.33、200.00±10.01、213.33±11.55,125.33±5.69、136.00±4.52、155.33±6.51)与同组0 h(100.00±0.00、100.00±0.00)比较,差异有统计学意义(P均＜ 0.05),且24、36、48 h α3nAChR沉默组明显高于对照组(t=9.26、7.63、5.72,P均＜0.05).随着染氟时间延长,α3nAChR沉默组和对照组磷酸化JNK表达逐渐升高,其中12、24、36、48 h α3nAChR沉默组(154.00±6.25、149.00±5.57、156.00±6.08、141.67±2.52)和8、12、24、36、48 h对照组(133.33±10.69、173.00±4.00、175.00±11.79、200.67±11.93、200.33±18.58)与同组0 h(100.00±0.00、100.00±0.00)比较,差异有统计学意义(P均＜ 0.05),且8、12、24、36、48 h α3nAChR沉默组明显低于对照组(t=-428、-5.02、-2.89、-8.33、-6.18,P均＜0.05).24、36、48 h对照组磷酸化p38激酶表达(120.33±4.51、122.00±7.55、119.67±7.57)明显高于0h(100.00±0.00,P均＜0.05),且高于同时间点α3nAChR沉默组(93.33±9.61、94.00±5.01、98.33±5.69,t=-4.01、-6.73、-5.59,P均＜0.05).两组细胞中总ERK1/2、总JNK、总p38激酶表达随染氟时间延长未见明显改变(P均＞ 0.05).结论 在过量氟暴露条件下,ERK1/2信号通路的激活不完全依赖于α3nAChR的表达;而JNK和p38两条通路的激活在一定程度上依赖于α3nAChR.
关键词： 神经型尼古丁受体 丝裂原活化蛋白激酶 人神经母细胞瘤细胞系 -
脑通复方对血管性痴呆大鼠海马尼古丁受体的影响
目的 观察脑通复方制剂对拟血管性痴呆(VaD)模型大鼠脑组织神经型尼古丁受体(Nicotinic acetylcholine receptors ,nAChR)的影响,分析脑通复方制剂改善血管性痴呆学习记忆能力的作用机制.方法 采用改良Pulsinelli四血管阻断(Pulsinelli's four-vessel occlusion, 4-VO)法复制大鼠血管性痴呆模型,脑通复方制剂治疗后观察学习记忆能力,Western-blot法测定脑组织神经型尼古丁受体蛋白水平.结果 脑通复方制剂可缩短实验大鼠逃避潜伏期,增加跨越平台次数,上调海马组织神经型尼古丁受体的表达.结论 脑通复方制剂可通过上调nAChR表达,从而改善血管性痴呆学习记忆能力.
