首页 > 文献资料
-
15－脱氧前列素2抑制MG63细胞活性并诱导其凋亡的机制
目的：研究过氧化物酶体增殖活化受体（PPAR）γ的内源性配体15－脱氧前列素2（15d－PGJ2）对骨肉瘤细胞株MG63的增殖活性的影响及诱导其凋亡可能的作用机制。方法采用人骨肉瘤细胞MG63，分别用终浓度为0．1、1、5、10和50μmol／L15d－PGJ2处理，对照组不给予药物，四甲基偶氮唑蓝（ MTT）法测定药物作用24 h、48 h、72 h及96 h细胞增殖的变化；流式细胞术（ FCM）结合AnnexinV／PI双染色观察终浓度5μmol／L和20μmol／L15d－PGJ2作用48 h和72 h MG63细胞周期变化及诱导细胞凋亡和坏死情况；逆转录聚合酶链式反应（RT－PCR）检测终浓度20μmol／L 15d－PGJ2处理48 h对MG63细胞中PPARγmRNA的表达影响；通过免疫细胞化学技术检测终浓度20μmol／L15d－PGJ2作用48 h，MG63细胞中凋亡相关蛋白caspase3，p53和Bax／bcl－2的表达情况。结果 MTT结果显示：①各浓度15 d－PGJ2作用24 h、48 h、72 h及96 h，对MG63细胞增殖均有抑制作用，48 h达到佳抑制效果。48 h、72 h及96 h抑制率两两比较均无差异（ P＞0．05），且50μmol／L对细胞的抑制率几乎达100％；②在各时间点，各浓度组间比较均有差异（ P＝0．000），在0．1～50μmol／L浓度组区间，相同时间点的抑制率有随浓度升高而递增的趋势。流式细胞术检测结果显示：不同浓度的各细胞周期分布差异有统计学意义（P＝0．000）。加药组G0／G1期细胞比例均高于对照组，S和G2／M期相应减少，且细胞凋亡率增高，表明加药组可使细胞G0／G1期阻滞且诱导细胞凋亡；RT－PCR检测PPARγmRNA的表达，并同时逆转录稳定的内参片段β－actin，以二者的面积灰度值比值作为该mRNA的相对表达量，20μmol／L 15d－PGJ2作用48 h，PPARγmRNA的相对表达量（2．06±0．35）与对照组（0．94±0．23）比较有差异（P＜0．05）；免疫细胞化学结果显示：药物干预组凋亡相关蛋白caspase3和 Bax表达与对照组比较显著增加，而 p53和 bcl－2表达下降（P＜0．05）。结论①PPARγ激动剂15d－PGJ2能明显抑制人骨肉瘤MG63细胞的生长，引起细胞G1期阻滞并诱导细胞凋亡。②15d－PGJ2可能通过增加PPARγmRNA表达，上调凋亡相关蛋白caspase3和Bax及下调p53和bcl－2表达而诱导细胞凋亡。
关键词： 15 d-PGJ2 过氧化物酶体增殖活化受体 骨肉瘤 MG63 凋亡
