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JNK通路在氯通道阻断剂抑制Aβ25～35诱导细胞凋亡中的作用
目的 探讨JNK通路在氯通道阻断剂4,4'-diisothioeyano-2,2'-disulfonic acid stilbene(DIDS)及Phloretin在β淀粉样蛋白活性片段(Aβ,Aβ25～35)诱导PC12细胞凋亡过程中作用.方法 采用MTT比色法、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogen,LDH)活力检测、琼脂糖凝胶电泳法,比较正常对照组、Aβ25～35损伤组和Aβ25～35+Phloretin组、Aβ25～35+DIDS组的PC12细胞存活与凋亡;Western印迹法检测4组的JNK、P4NK蛋白表达.结果 10 μmol/L Phloretin和50 μmol/L DIDS均能抑制Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡,提高细胞存活率,减少LDH释放,降低PJNK蛋白的水平.结论 JNK的磷酸化水平下调,参与了氯通道阻断剂抑制的Aβ25～35诱导的PC12细胞凋亡.
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侧脑室注射DIDS对缺血再灌注脑损伤大鼠神经元凋亡的拮抗作用
目的：观察侧脑室注射氯通道阻断剂DIDS对在体神经元凋亡的影响。方法：72只雄性SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注（ I／R）组、生理盐水组和DIDS组。除假手术组，余3组用线栓法建立大鼠局灶性缺血再灌注脑损伤模型。模型制备成功后生理盐水组和DIDS组分别立即通过侧脑室注射生理盐水和有效剂量的DIDS。72 h后TTC染色观察脑梗死灶面积，用HE染色观察脑组织形态学的变化，Western blot 法观察海马CA1区活性Caspase-3的表达。结果：假手术组无脑梗死灶出现，海马CA1区神经元排列较好，胞体饱满，折光性较好；余3组脑梗死灶面积差异有统计学意义（ F＝4．778，P＝0．025）；I／R组和生理盐水组有明显的梗死灶出现，海马CA1区神经元排列错乱，水肿，间隙增宽；与I／R组和生理盐水组相比，DIDS组脑梗死面积缩小（P＜0．05），组织形态明显改善。4组海马CA1区活性 Caspase-3表达差异有统计学意义（ F ＝166．700， P ＜0．001）；假手术组有少量活性Caspase-3表达；I／R组和生理盐水组活性Caspase-3表达下降（P＜0．05）；与I／R组和生理盐水组相比，DIDS组活性Caspase-3表达降低（P＜0．05）。结论：DIDS对在体神经元的凋亡有拮抗作用，对大鼠缺血再灌注脑损伤有保护作用。
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氯通道阻断剂 DIDS对过氧化氢诱导 PC12细胞凋亡的影响
目的：探讨氯通道阻断剂DIDS抗PC12细胞凋亡的作用机制。方法：取处于对数生长期的PC12细胞，随机分为对照组、模型组（用400 nmol／L H2 O2诱导细胞凋亡）和DIDS组（ H2 O2＋DIDS），培养12 h后，用MTT法测定各组细胞的存活率，Western blot法观察凋亡相关蛋白Caspase－3和Bcl－2蛋白的表达情况，用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：400 nmol／L H2 O2可以明显诱导PC12细胞损伤，细胞存活率为（35．07±1．23）％；DIDS组细胞存活率明显高于模型组，且具有一定浓度依赖性（ F＝640．420，P＜0．001）。与对照组比较，模型组细胞凋亡率和Caspase－3蛋白表达增加，Bcl－2蛋白表达降低（P＜0．05）；与模型组相比，DIDS组Caspase－3表达降低，Bcl－2蛋白表达增加，细胞凋亡率降低（ P＜0．05）。结论：DIDS可能通过抑制Caspase－3依赖性凋亡信号通路发挥抗凋亡作用。
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DIDS对I/RI心肌组织中信号分子PI3K/Akt及ROS的调控
目的:探讨氯离子通道阻断剂4,4-二异硫氰基芪-2,2'-二磺酸(4,4'-Diisothiocyanostilbene-2,2'-disulfonic acid,DIDS)对缺血/再灌注损伤(Ischemia/reperfusion injury,I/RI)心肌组织中信号分子磷脂酰肌醇-3激酶(Phosphoinositide-3 kinase,PI3K)/蛋白激酶B(Protein kinase B,Akt)及活性氧(ROS)的调控.方法:常规建立SD大鼠I/RI心脏模型,32只,随机分成4组(n=8),分为假手术组、I/R组、过氧化氢酶(CAT)组及DIDS组.伊文思蓝和红四氮唑(TTC)双染色法检测大鼠心肌梗死面积、荧光分光光度计法检测心肌组织中,ROS的含量、用western blot蛋白印迹法检测Akt和p-Akt的水平,TUNNEL法检测心肌细胞凋亡,以及检测血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性及丙二醛(MDA)的含量.结果:①与I/R组对比,DIDS组和CAT两组的心肌梗死面积、细胞凋亡数、血清CK、LDH的活性均明显减少(P＜0.05);但DIDS和CAT二组间无差异.②与I/R组对比,DIDS组和CAT组血清中MDA的含量明显减小;而SOD的活性明显升高(P＜0.05);与DIDS组比较,CAT组SOD的活性明显升高(P＜0.05)、MDA的含量明显减少(P＜0.05).③与I/R组对比,CAT组和DIDS组心肌组织中ROS的含量显著降低(P＜0.05);CAT组较DIDS组降低的更明显(P＜0.05).④各组心肌组织中总Akt的表达无显著差异.与假手术组相比,I/R、DIDS和CAT 3组p-Akt的水平均有明显升高(P＜0.05);DIDS组p-Akt的水平显著高于I/R和CAT组(P＜0.05);但I/R和CAT两组间无差异.结论:DIDS同时具有激活PI3K/Akt信号通路及降低ROS水平,减轻I/RI,达到保护心肌组织的作用.
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DIDS对缺血/再灌注损伤大鼠心脏血流动力学、心律失常和心肌酶活性的影响
目的 观察4,4'-二异硫氰基芪-2,2'-二磺酸(4,4'-diisothiocyanostilbene-2,2'-disulfonic acid,DIDS)对在体大鼠缺血/再灌注损伤(ischemia/reperfusion injure,I/RI)心脏的心律失常、心肌酶活性和血流动力学的影响.方法 雄性SD大鼠25只随机分为5组,每组5只:假手术组、I/R组、I/R+DIDS(7 mg/kg)组、I/R+DIDS(14 mg/kg)组及I/R+DIDS(28 mg/kg)组.于再灌注即刻,经股静脉以程控微量泵给予DIDS[4 ml/(kg·h)]2 h.于缺血前、后和再灌注后,记录心脏血流动力学指标、心电图变化,再灌注后测定各组血清肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性.结果 DIDS可改善缺血30 min/再灌注4 h,心脏的血流动力学指标,与假手术组相比,I/R组的左室舒张末期压(LVEDP)明显升高;而左室收缩压(LVSP)、左室内压上升的大速率(+dp/dtmax)和左室内压下降的大速率(-dp/dtmax)明显下降(P＜0.05);降低心脏心律失常积分,再灌注期间,在假手术组、I/R组、I/R+DIDS(7 mg/kg)组、I/R+DIDS(14 mg/kg)组、I/R+DIDS(28 mg/kg)组的心律失常积分值,分别是1.20±0.45,4.57±1.62.3.97±1.51,3.23±1.13和3.56±1.47,表明DIDS可明显抑制再灌注期心律失常(P＜0.05),尤以I/R+DIDS(14 mg/kg)组为显著(P＜0.01);减少外周血CK和LDH的活性,与I/R组相比,DIDS组LDH和CK的活性明显降低(P＜0.05).结论 DIDS具有保护I/RI的作用,减少再灌注后的心律失常、抑制心肌酶释放和改善心脏的功能.
