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NM23 B对大鼠肝细胞体外增殖的影响
目的：观察NM23B在体外培养大鼠肝细胞增殖中的作用。方法构建NM23B 过表达载体和干扰载体及其阴性对照载体，分别转染SD大鼠BRL-3A肝细胞，并设空白对照组（CON）、干扰 NC 组（siRNA-NC）、干扰组（siRNA）、过表达组（OE）、过表达 NC 组（OE-NC），通过定量PCR分析各组细胞中Cyclin D1、NM23B和PCNA的mRNA变化；Western印迹分析比较各组细胞中Cyclin D1、NM23B和PCNA蛋白的变化；流式细胞仪检测各组细胞周期比例；用CCK 8法检测细胞增殖。结果 OE组 Cyclin D1、NM23 B和 PCNA的 mRNA及蛋白的表达量较 CON 组显著增多（ P＜0.05）；另一方面，siRNA组的Cyclin D1、NM23B和PCNA的mRNA及蛋白的表达量较CON组显著降低（P＜0.05），干扰NC组和OE-NC组与CON组相比无统计学差异（P＞0.05）。 OE组的G0／G1期细胞比例明显低于CON组（P＜0.05），siRNA组的G0／G1期细胞比例明显高于 CON组（P＜0.05）。同时，OE组的S期细胞比例明显高于CON组（P＜0.05），siRNA组的S期细胞比例明显低于CON组（P＜0.05），siRNA-NC组和 OE-NC 组与CON组相比无统计学差异（P＞0.05）。 CCK-8检测细胞增殖表明OE组的增殖速度明显快于 CON组（P＜0.05），siRNA组的增殖速度明显慢于CON组（P＜0.05），siRNA-NC组和OE-NC组与CON组相比无统计学差异（P＞0.05）。结论过表达 NM23B可以加强 Cyclin D1、PCNA的表达，缩短细胞周期，从而促进肝细胞增殖；干扰NM23B表达则削弱了Cyclin D1、PCNA的表达，延长细胞周期，从而抑制肝细胞增殖。证实了 NM23B在体外培养 SD大鼠肝细胞增殖中的作用，为后续体内实验奠定了理论基础。
关键词： NM23B 大鼠BRL-3A肝细胞 细胞周期 增殖 -
MiR-199a-3p对大鼠肝细胞增殖的抑制作用
目的 探讨miR-199a-3p对体外培养SD大鼠BRL-3A增殖的影响.方法 人工合成miR-199a-3p模拟物、miR-199a-3p阻遏物及其各自阴性对照载体,分别转染BRL-3A肝细胞,转染后12 h、24h、48 h和72h,应用定量PCR分析细胞中Cyclin D1和PCNA mRNA表达水平,免疫组化方法观测Cyclin D1和PCNA阳性细胞比率,流式细胞仪检测细胞各周期比例和CCK 8法检测细胞增殖.实验分4组:mimics组,mi-nc组,in-hibitors组和in-nc组.结果 转染后24h、48 h、72 h,inhibitors组肝细胞Cyclin D1和PCNA mRNA表达水平较in-nc组显著增多(P＜0.05),而mimics组肝细胞Cyclin D1和PCNA mRNA表达水平较mi-nc组显著降低(P＜0.05).inhibitors组肝细胞Cyclin D1和PCNA阳性细胞比率均高于mi-nc组(P＜0.05),而mimics组肝细胞Cy-clin D1和PCNA阳性细胞比率均低于mi-nc组(P＜0.05).inhibitorss组肝细胞G0/G1期细胞比例明显低于in-nc组(P＜0.05),而mimics组肝细胞G0/G1期细胞比例明显高于mi-nc组(P＜0.05).同时,inhibitors组肝细胞S期细胞比例明显低于mi-nc组(P＜0.05)和in-nc组(P＜0.05).inhibitors组肝细胞增殖能力明显高于in-nc组(P＜0.05),mimics组肝细胞增殖能力明显低于mi-nc组(P＜0.05).结论 miR-199a-3p能够延长大鼠BRL-3A肝细胞周期和抑制肝细胞增殖,其作用可能与抑制Cyclin D1和PCNA的表达有关.
