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NM23 B对大鼠肝细胞体外增殖的影响
目的:观察NM23B在体外培养大鼠肝细胞增殖中的作用。方法构建NM23B 过表达载体和干扰载体及其阴性对照载体,分别转染SD大鼠BRL-3A肝细胞,并设空白对照组(CON)、干扰 NC 组(siRNA-NC)、干扰组(siRNA)、过表达组(OE)、过表达 NC 组(OE-NC),通过定量PCR分析各组细胞中Cyclin D1、NM23B和PCNA的mRNA变化;Western印迹分析比较各组细胞中Cyclin D1、NM23B和PCNA蛋白的变化;流式细胞仪检测各组细胞周期比例;用CCK 8法检测细胞增殖。结果 OE组 Cyclin D1、NM23 B和 PCNA的 mRNA及蛋白的表达量较 CON 组显著增多( P<0.05);另一方面,siRNA组的Cyclin D1、NM23B和PCNA的mRNA及蛋白的表达量较CON组显著降低(P<0.05),干扰NC组和OE-NC组与CON组相比无统计学差异(P>0.05)。 OE组的G0/G1期细胞比例明显低于CON组(P<0.05),siRNA组的G0/G1期细胞比例明显高于 CON组(P<0.05)。同时,OE组的S期细胞比例明显高于CON组(P<0.05),siRNA组的S期细胞比例明显低于CON组(P<0.05),siRNA-NC组和 OE-NC 组与CON组相比无统计学差异(P>0.05)。 CCK-8检测细胞增殖表明OE组的增殖速度明显快于 CON组(P<0.05),siRNA组的增殖速度明显慢于CON组(P<0.05),siRNA-NC组和OE-NC组与CON组相比无统计学差异(P>0.05)。结论过表达 NM23B可以加强 Cyclin D1、PCNA的表达,缩短细胞周期,从而促进肝细胞增殖;干扰NM23B表达则削弱了Cyclin D1、PCNA的表达,延长细胞周期,从而抑制肝细胞增殖。证实了 NM23B在体外培养 SD大鼠肝细胞增殖中的作用,为后续体内实验奠定了理论基础。
关键词: NM23B 大鼠BRL-3A肝细胞 细胞周期 增殖