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Six1基因siRNA联合雷公藤内酯醇对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭的影响及机制
目的 探讨Six1基因siRNA联合雷公藤内酯醇(TRL)对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭的影响及机制.方法 参照脂质体LipofectamineTm2000转染说明将si-Six1瞬时转染生长至对数期的人骨肉瘤MG63细胞,50 ng/ml·ml TRL处理细胞,随机分为NC组(转染合成的非特异性的siRNA)、si-Six1组(干扰Six1表达的特异性的siRNA)、TRL醇组(50 ng/ml的TRL处理细胞)和si-Six1 +TRL组(在转染si-Six1的基础上加入TRL),Western blotting检测Six1、p-JAK2、p-STAT3、cyclinD1、Bax、MMP-2的蛋白表达;CCK8检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Transwell小室检测细胞侵袭能力.结果 转染si-Six1的MG63细胞Six1的蛋白表达显著低于NC组(P＜0.05);与NC组比较,si-Six1组和TRL组细胞活力均明显降低,细胞凋亡率显著升高,细胞侵袭能力显著降低,p-JAK2、p-STAT3、cyclinD1和MMP-2的蛋白表达均显著降低,Bax蛋白表达显著升高(P＜0.05),而联合使用si-Six1组和TRL对细胞活力、凋亡率、侵袭能力及JAK2/STAT3信号的影响强于单独用si-Six1或TRL.结论 抑制Six1表达及TRL均能有效的抑制骨肉瘤细胞活力及侵袭能力,诱导细胞凋亡,两者联合作用更强,其机制可能与下调JAK2/STAT3信号通路有关.
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下调Six1基因表达对胃癌细胞生物学特性及B7-H1表达的影响
目的 探讨抑制胃癌细胞Six1表达对癌细胞增殖侵袭及B7-H1表达的影响及机制.方法 以人正常胃黏膜上皮细胞GES-1为对照细胞,Western印迹检测胃癌MKN45、BGC823和AGS细胞Six1的蛋白表达;参照LipofectamineTM2000转染说明将非特异性siRNA(NC组)和Six1特异性的siRNA(si-Six1组)转染BGC823细胞,并设置空白对照组,转染48 h,通过MTT及Tran-swell小室分别检测各组细胞活力及侵袭能力;Western印迹检测Six1、B7-H1及JAK2/STAT3信号通路磷酸化的JAK2、STAT3及下游分子细胞周期蛋白(cyclin)D1和基质金属蛋白酶(MMP)-2的蛋白表达.结果 胃癌MKN45、BGC823和AGS细胞Six1的表达均显著高于在GES-1细胞表达(P<0.05);转染si-Six1的BGC823细胞Six1的蛋白表达显著低于空白对照组(P<0.05);与NC组比较,si-Six1组细胞活力及侵袭能力均显著降低,B7-H1、p-JAK2、p-STAT3、cyclinD1和MMP-2的蛋白表达均显著降低(P<0.05).结论 下调胃癌细胞Six1表达可降低癌细胞活力及侵袭能力,降低B7-H1表达,机制可能是抑制JAK2/STAT3信号通路.
关键词： 胃癌 Six1基因 侵袭 B7-H1 JAK2/STAT3信号通路 -
Six1基因在乳腺癌组织表达及RNA干扰其表达对癌细胞增殖侵袭能力的影响
目的 探讨Six1基因在乳腺癌组织表达及RNA干扰其表达对癌细胞增殖侵袭能力的影响.方法 通过RT-PCR及Western印迹分别检测Six1在乳腺癌组织的mRNA及蛋白表达;通过脂质体Lipofectami-neTM2000将Six1的小干扰RNA(siRNA)(Six1-siRNA组)转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,设置空白对照组和阴性对照组(NC组),转染48 h后检测各组细胞中Six1的蛋白表达;细胞计数试剂盒(CCK8)法检测细胞活力,Transwell小室检测细胞侵袭能力;Western印迹检测细胞增殖蛋白ki67、 侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶2(MMP-2)、 基质金属蛋白酶9(MMP-9)及信号转导与转录因子3(STAT3)和磷酸化的STAT3的蛋白表达.结果 乳腺癌组织中Six1的mRNA及蛋白表达均显著高于癌旁组织(P<0.05);转染Six1的siRNA组细胞Six1的蛋白表达显著低于空白对照组(P<0.05);与空白对照组比较,Six1-siRNA组细胞活力及侵袭能力均显著低于空白对照组,ki67、MMP-2、MMP-9和p-STAT3蛋白表达均显著低于空白对照组(P<0.05),3组间STAT3的蛋白表达无显著性差异(P>0.05).结论 乳腺癌组织中Six1高表达,抑制其表达可通过下调STAT3信号降低细胞的活力及侵袭能力.
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先天性小耳畸形EYA1和SIX1基因检测分析
目的 了解先天性小耳畸形患者是否存在EYA1和SIX1基因突变.方法 选择先天性小耳畸形患者100例,包括13个家系的先证者和家系其他患病成员共31人及散发患者69人,其中,小耳畸形伴耳前凹34例,小耳畸形伴耳前赘或副耳22例,小耳畸形伴腭裂8例,小耳畸形伴面部不对称21例,单纯小耳畸形15例,通过PCR和直接测序对EYA1和SIX1基因进行突变检测.结果 检测到4种EYA1核苷酸改变,分别为258G>A(Q86Q)、813A>G(T271T),1278C>T(G426G)和1755T>C(H585H).1例散发患者检测到SIX1外显子1非编码区219位C>T;另2例散发患者SIXl外显子1～28位碱基G缺失.结论 本实验未在先天性小耳畸形伴耳前凹、耳前赘患者中发现EYA1和SIX1基因已知热点突变.
