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重组人血管生长素的鉴定
目的:为了鉴定自行制备的重组人血管生长素.方法:采用凝胶扫描法分析纯度;E LISA等方法检测特异性;鸡胚绒毛尿囊膜实验检测生物活性,并与商品化标准品进行免疫结合性的对比研究.结果:重组血管生长素纯度达96%,具有促进血管生长的生物活性;而且较标准品有理想的免疫结合性.结论: 该重组人血管生长素可用于进一步的实验和临床应用研究.
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重组人血管生长素基因工程菌发酵条件的初步研究
目的研究表达重组人血管生长素(rhANG)工程菌的发酵条件.方法采用摇瓶发酵,研究不同宿主菌对表达rhANG的影响,同时对培养基、诱导时期、诱导时间和初始pH等发酵条件以及质粒稳定性进行研究.结果选用E.coli CDH为宿主菌,在SOB培养基中培养至A600nm为0.5～0.6时,诱导表达5 h,rhANG表达量高达30%.重组质粒具有良好的分离稳定性和结构稳定性.结论此发酵条件可以较好地提高rhANG的表达量,为发酵规模的扩大奠定了基础.
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抗rhANG多克隆抗体的制备及初步应用
目的制备抗重组人血管生长素(recombinant human angiogenin,rhANG)多克隆抗体,并初步应用于消化道肿瘤实验研究.方法用重组基因工程菌表达,SDS法纯化的rhANG蛋白免疫新西兰兔,制备并纯化多克隆抗体,并用免疫组织化学和ELISA等方法对多克隆抗体进行测定.结果此次获得的抗血清ELISA方法效价达1:12 800,检测ANG灵敏度低为8～16μg/L,不与其他细胞因子和血清反应.该抗体与20%～30%上消化道恶性肿瘤呈阳性反应.结论ANG多克隆抗体对表达ANG的肿瘤组织反应特异性强,ELISA方法检测灵敏度高,该抗体可用于ANG的检测.
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重组人血管生长素的纯化
目的建立表达重组人血管生长素(recombinant human angiogenin, rhANG)的简便纯化工艺,为扩大生产及临床应用打下基础.方法工程菌经超声破碎,离心洗涤后,变性萃取rhANG的包涵体,通过Sephacryl S-200柱层析分离,再经CuCl2复性,得到rhANG纯品.结果所获取rhANG的纯度达96%以上,蛋白回收率为80%,活性测定经鸡胚绒毛尿囊膜(chorioallantoic membrane, CAM)测试法显示,该rhANG具有明显的促血管生长作用.结论建立了一套较为简捷的rhANG纯化技术.
