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诱导型启动子在谷氨酸棒杆菌ATCC13032中调控强度的分析
目的 研究诱导型启动子Ptrc、Ptac、ParaBAD、Prha、Ptet在谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)AT℃C13032生长迟缓期、对数期、稳定期和衰亡期四个时期的相对转录强度.方法 在待测启动子后连接报告基因β-半乳糖酶基因LacZ克隆入质粒pMBBL,并转入谷氨酸棒杆菌ATCC13032.取菌体生长迟缓期、对数期、稳定期、衰亡期四个时期诱导和不诱导的细胞,经超声波粉碎后,检测半乳糖酶的酶活.结果 通过菌株生长曲线,确定3、11、24和48 h为菌种生长迟缓期、对数期、稳定期和衰亡期的取样时间点.启动子在不同生长时期转录强度不同,以Ptrc为例,转录强度由强至弱依次为诱导培养24h＞48h＞11 h＞3h;添加诱导剂条件下,培养11h启动子表达相对强度由强至弱依次是Ptrc＞ Ptet＞ParaBAD＞ Ptac＞ Prha.结论 各种诱导型启动子的表达强度在有无诱导剂的条件下显著不同.
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L-精氨酸菌种选育及优化方法
L-精氨酸(L-Arginine,以下缩写成L-Arg)是Arg生物合成途径的终产物,是人和动物的半必需碱性氨基酸,是幼小动物的必需氨基酸.L-精氨酸在医药工业上具有广泛用途,是生物体尿素循环中的一种重要中间代谢物.它是复方氨基酸输液的主要成分之一,被广泛用于氨中毒性肝昏迷的解毒剂和肝功能的促进剂,对病毒性肝炎疗效显著,同时对肠道溃疡、血栓形成、神经衰弱和男性无精等症状都有一定的治疗效果.精氨酸还可使尿素循环活化,降低血氨,使肝昏迷症状缓解.L-精氨酸是配制营养或特殊治疗用品的重要原料.
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L-精氨酸产生菌的选育及其发酵条件
以谷氨酸棒杆菌(Glutamicum corynebacterium)JHA5(His-,SGr)为出发菌株,经硫酸二乙酯(DES)和亚硝基胍(NTG)逐级诱变处理,获得一株精氨酸高产菌JDN28-50(His-SGrD-ArgrL-HAr).在以120g/L葡萄糖为碳源、50 g/L硫酸铵为氮源的培养基中培养4 d,产酸可达30 g/L.
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钴60与紫外线复合诱变选育L-鸟氨酸高产菌株
目的 诱变选育L-鸟氨酸高产菌株.方法 以谷氨酸棒杆菌S9114为出发菌株,经60Co γ射线和紫外线复合诱变处理,选育出L-鸟氨酸的高产菌株,研究其佳发酵条件.结果 选育出一株L-鸟氨酸的高产菌株HG106-25,遗传标记为精氨酸营养缺陷型+磺胺胍抗性(Arg-+SGr).结论 突变株HG106-25在优化发酵条件后,摇瓶发酵4-5 d,L-鸟氨酸平均产量为14.7 g·L-1,达较高水平,可进行放大试验.
