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转导EB病毒转录的EBERs促进MDCK细胞的恶性化
[目的] 通过转导EB病毒(Epstein-Barr Virus,EBV)转录的核内小RNA(EBV encoded small RNAs,EBERs)探讨其对上皮细胞株MDCK细胞生长特性的影响.[方法] 用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术从EB病毒阳性的鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)由来的NPC-KT细胞中扩增出EBERs片段.为了在细胞内大量表达EBERs,利用分子生物学技术,制作了EBERs片段的5次重复排列的5EBERs和10次重复排列的10EBERs.分别插入pCEP4载体质粒,并导入MDCK细胞内.利用Northern Blot法确定细胞内EBERs的表达后,对其在培养中的细胞生长特性和软琼脂中的细胞克隆形成进行了观察.[结果] 在培养中大量表达EBERs的MDCK细胞之间丧失了细胞间的相互连接,细胞呈纺锤状,并在软琼脂中形成大量细胞克隆.而非表达EBERs的MDCK细胞的对照组中没有发现细胞生长特性的改变和大量细胞克隆形成.[结论] EBERs的大量表达可以造成MDCK细胞的分散活性和基质非依赖性.提示EBERs在上皮细胞株MDCK细胞中有癌化作用,从而推论EBERs在同样源于上皮细胞的鼻咽癌中也可能有癌化作用.另外,表达EBERs的MDCK细胞的建立为进一步研究EBERs的作用提供了一个有用的上皮细胞模型.
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EBERs对鼻咽癌转移的作用及其机制研究
目的 探讨EBERs对鼻咽癌转移的作用及其机制.方法 在鼻咽癌细胞中转染EBERs,荧光定量PCR(RT-PCR)检测细胞中转移相关指标(如MMP)的相对表达量,同时Transwe11检测EBERs对鼻咽癌细胞迁移能力的影响.构建敲除EBERs的BAC-EBV(p2089)质粒,转染鼻咽癌细胞,检测细胞的转移能力.转染EBERs后Western blot检测上皮间质转化(EMT)相关指标,免疫荧光检测ZO-1的表达.结果 鼻咽癌细胞转染EBERs质粒或p2089质粒后,RT-PCR检测发现转移相关指标表达升高,Transwell检测结果显示细胞迁移能力增强,而在干扰EBERs或转染敲除EBERs的p2089质粒后,转移能力减弱.转染EBERs后E-cadherin表达降低,Vimentin升高,同时免疫荧光检测发现ZO-1表达降低.结论 EBERs可能通过促进EMT高表达而促进鼻咽癌的转移.
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133例霍奇金淋巴瘤中EBERs表达与临床分期、疗效相关性分析
目的 探讨霍奇金淋巴瘤中EBV感染情况,通过EBERs原位杂交,分析其表达与HL临床分期之间的关系;此外,进一步探讨EBV的感染对于HL化疗疗效的影响.方法 收集了133例霍奇金淋巴瘤患者的石蜡标本、以及查阅详细的临床资料,进行EBERs原位杂交染色,统计分析EBERs的表达与临床分期之间的关系;统计EBV阳性与阴性例数,分组分析EBV对化疗总有效率的影响.结果 Pearson相关分析显示,EBERs的表达与临床分期呈正相关;单因素统计显示,EBV阳性组化疗有效率低于EBV阴性组.结论 EBERs的表达率高的HL患者其临床分期较晚,EBV阳性患者化疗有效率欠佳,提示EBERs可作为HL的独立预后因素.
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EB病毒与结直肠癌的相关性
背景与目的:研究表明,EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)除与鼻咽癌密切相关外,可能与其它癌症相关.本研究旨在探讨EBV与中国人结直肠癌的关系.方法:采用PCR方法从90例原发性结直肠癌标本及25例配对的癌旁标本检测EBV LMP1(latent membrane protein 1)基因的第3外显子及BamH Ⅰ W片段的部分序列;采用免疫组织化学方法检测EBNA1(EBV nuclear antigen 1)和LMP1的表达,采用原位杂交检测EBERs(EBV-encoded RNAs)的表达.结果:在90例原发性结直肠癌标本中,EBV基因阳性率为27.7%(LMP1外显子3)和32.2%(W片段),而25例癌旁组织中只有1例(4.0%)EBV基因阳性,癌组织和癌旁组织EBV阳性率差异有显著性(P＜0.001).29例W片段阳性的大肠癌标本中,有23例(79.3%)EBNA1表达阳性,只有1例(3.4%)EBERs阳性,阳性细胞主要为癌细胞,阳性信号集中在核内;而在8例W片段阴性的标本中,未检测到EBNA1的表达,也未检测到EBERs;以上标本中均未检测到LMP1的表达.结论:EBV与部分中国人结直肠癌相关.
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鼻咽癌组织中EBERs与BMI-1表达相关性研究
目的 探讨鼻咽癌组织中EBERs与BMI-1表达相关性.方法 对2007年12月至2009年11月收治的40例鼻咽癌患者的石蜡包埋切片进行研究:原位杂交方法检测这些切片中EBERs的表达;免疫组化方法检测这些切片中BMI-1的表达.结果 40例鼻咽癌组织中EBERs情况:高表达组为11例,低表达组为29例,合计阳性表达率为100％ (40/40).40例鼻咽癌组织中BMI-1情况:BMI-1阳性表达率为32.5％ (13/40).鼻咽癌组织中EBERs表达与BMI-1表达差异无统计学意义,P＞0.05.结论 鼻咽癌中EBERs表达与BMI-1表达无相关性,有待进一步研究,并探讨二者在鼻咽癌中的机理.
